REPLIEMENT D'ACIDES NUCLEIQUES RICHES EN CYTOSINES (DU CONTROLE ARTIFICIEL DE L'EXPRESSION DES GENES A LA RECONNAISSANCE PAR DES PROTEINES CELLULAIRES)

LE MOTIF I EST UNE STRUCTURE D'ADN A 4 BRINS IMPLIQUANT LA FORMATION DE PAIRES C.C + HEMIPROTONEES ET INTERCALEES. DANS LE CADRE DE LA STRATEGIE ANTI-GENE, NOUS AVONS ETUDIE L'EFFET DE MODIFICATIONS CHIMIQUES D'OLIGONUCLEOTIDES SUR LA FORMATION DU MOTIF I, STRUCTURE QUI PEUT ENTRER EN COMPETITION AVEC LA FORMATION DE LA TRIPLE-HELICE PYRIMIDIQUE. CES DEUX STRUCTURES, NECESSITANT LA PROTONATION DES CYTOSINES, SONT PLUS STABLES A PH ACIDE. CERTAINES MODIFICATIONS CHIMIQUES (ARN, 2-O-METHYL) DESTABILISENT LE MOTIF I ET STABILISENT LA TRIPLE-HELICE ALORS QUE, DANS LE CAS DES PROPYNYL-URACILES, LE MOTIF I EST STABILISE AU DETRIMENT DE LA TRIPLE-HELICE. LA FORMATION D'UNE TRIPLE-HELICE AVEC UN OLIGONUCLEOTIDE POSSEDANT DES UNITES MORPHOLINOS A LA PLACE DES SUCRE A ETE DEMONTREE. A PH NEUTRE ET 140 MM KCI EN PRESENCE 10 MM MG 2 +, LA TRIPLE-HELICE AVEC UN TROISIEME BRIN N3P5 PHOSPHORAMIDATE EST LA PLUS STABLE ALORS QU'EN PRESENCE DE CONCENTRATIONS D'IONS MAGNESIUM FAIBLES OU NULLES (1 MM), SEULE LA TRIPLE-HELICE AVEC UN TROISIEME BRIN MORPHOLINO SE FORME. UN OLIGONUCLEOTIDE MIMANT LE BRIN RICHE EN CYTOSINES DES REPETITIONS TELOMERIQUES DES VERTEBRES (C 3TA 2) N PEUT FORMER UN MOTIF I A PH PHYSIOLOGIQUE, MAIS LA STABILITE DE CE DERNIER EST MODEREE (TM20\C). DES PROTEINES RECONNAISSANT CE TYPE DE SEQUENCE ET EVENTUELLEMENT STABILISANT LE MOTIF I POURRAIENT JOUER UN ROLE AU NIVEAU DES TELOMERES. NOUS AVONS MIS EN EVIDENCE L'EXISTENCE D'AU MOINS 3 FACTEURS PROTEIQUES PRESENTS DANS LES EXTRAITS NUCLEAIRES DE CELLULES HELA ET CAPABLES DE FIXER CETTE SEQUENCE DE MANIERE TRES SPECIFIQUE. EN CRIBLANT UNE BANQUE DE CDNA DE CELLULES HELA, NOUS AVONS IDENTIFIE DEUX PROTEINES, HNRNP K ET ASF/SF2. NOUS AVONS CONFIRME LA SPECIFICITE DE CETTE RECONNAISSANCE A L'AIDE DE PROTEINES RECOMBINANTES ET D'ANTICORPS. DANS LE CAS DE HNRNP K, NOUS AVONS AUSSI DETERMINE QUE LE DOMAINE KH CARBOXYTERMINAL (KH3) SUFFISAIT A CETTE RECONNAISSANCE. POUR ASF/SF2, LES DOMAINES AMINOTERMINAUX RRM1 ET RRM2 SONT IMPLIQUES DANS LA FIXATION DES REPETITIONS TELOMERIQUES. LA RECHERCHE D'AUTRES PROTEINES POUVANT RECONNAITRE CE TYPE DE SEQUENCE ET LA CARACTERISATION DE LA STRUCTURE DE L'OLIGONUCLEOTIDE ASSOCIE A CES PROTEINES SONT IMPORTANTES POUR LA COMPREHENSION D'UN EVENTUEL ROLE TELOMERIQUE DU MOTIF I.PARIS-Museum Hist.Naturelle (751052304) / SudocSudocFranceF