ETUDE DES PROTEINES ANTIVIRALES DE PHYTOLACCA AMERICANA (POKEWEED) MISE EN EVIDENCE D'UN COMPLEXE PROTEIQUE DANS LEQUEL L'ACTIVITE DE LA PAP EST INHIBEE. REALISATION DE PROTEINES CHIMERIQUES ASSOCIANT LA GONADOTROPIN-RELEASING HORMONE (GNRH) A LA PAP

LA PLANTE PHYTOLACCA AMERICANA (POKEWEED) PRODUIT EN GRANDES QUANTITES DES TOXINES PROTEIQUES APPELEES PAPS (POKEWEED ANTIVIRAL PROTEINS). ELLES BLOQUENT LA TRADUCTION EN INACTIVANT LES RIBOSOMES PAR DEPURINATION DE L'ADENINE 4324 DE L'ARN RIBOSOMAL 28S. LA GRANDE SENSIBILITE DES RIBOSOMES DE LA POKEWEED VIS-A-VIS DE LA PAP IMPLIQUE L'EXISTENCE DE MOYENS DE PROTECTION DE LA PLANTE CONTRE SES PROPRES TOXINES. NOUS AVONS MIS EN EVIDENCE, A L'AIDE D'ANTICORPS MONOCLONAUX, UNE FORME COMPLEXEE DE PAP (PAPI) DANS DES EXTRAITS DE FEUILLES DE POKEWEED. LA CAPACITE DE LA PAP, SOUS SA FORME COMPLEXEE, A INHIBER LA TRADUCTION IN VITRO, EST FORTEMENT REDUITE MAIS EST RESTAUREE APRES DENATURATION THERMIQUE DU COMPLEXE. LE CRIBLAGE D'UNE BANQUE D'ANTICORPS MONOCLONAUX ANTI-PAP NOUS A PERMIS DE CARACTERISER UN ANTICORPS SPECIFIQUE DE LA PARTIE C-TERMINALE DE LA PAP. CET ANTICORPS, UTILISE EN ELISA POUR DOSER LA PAP EST INCAPABLE DE DETECTER LA PAP DANS LE COMPLEXE PAPI MAIS PEUT DETECTER LA PAP LIBEREE DU COMPLEXE. LA PARTIE C-TERMINALE DE LA PAP SEMBLE IMPLIQUEE DANS LA FORMATION DE LA PAPI. DES ESSAIS DE PURIFICATION PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITE, A ANTICORPS POLYCLONAUX ANTI-PAP, MONTRENT QUE LA PAPI POURRAIT ETRE UN HOMODIMERE DE PAP OU UN COMPLEXE ASSOCIANT LA PAP ET UNE PROTEINE DE 21 KDA. CE COMPLEXE POURRAIT INTERVENIR DANS LA PROTECTION DE LA PLANTE VIS-A-VIS DE LA PAP. NOUS AVONS UTILISE LA PAP POUR LA REALISATION D'IMMUNOTOXINES. L'ADNC CODANT LA PAP A ETE CLONE ET LA PROTEINE A ETE FORTEMENT EXPRIMEE (10 MG/L) CHEZ E. COLI. APRES PURIFICATION, NOUS AVONS MONTRE QUE LA PAP RECOMBINANTE CONSERVE LES PROPRIETES BIOLOGIQUES DE LA PAP NATIVE. NOUS L'AVONS ASSOCIEE PAR COUPLAGE CHIMIQUE ET PAR GENIE GENETIQUE AU NEUROPEPTIDE GNRH (GONADOTROPIN-RELEASING HORMONE). DIFFERENTES CONSTRUCTIONS ONT ETE REALISEES. LA PROTEINE CHIMERIQUE GNRH-PAP A ETE EXPRIMEE CHEZ E. COLI ET PURIFIEE PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITE. LA PRESENCE DU GNRH ET DE LA PAP DANS LA PROTEINE DE FUSION A ETE CONTROLEE PAR WESTERN-BLOTTING ET IMMUNOPRECIPITATION. GNRH-PAP BLOQUE LA SYNTHESE PROTEIQUE IN VITRO AVEC UNE IC 5 0 DE 3 NM. ELLE EST CYTOTOXIQUE VIS-A-VIS DES CELLULES ISHIKAWA EXPRIMANT LE RECEPTEUR AU GNRH (ID 5 0 DE 15 NM), ALORS QUE LA PAP ET LE GNRH SEULS SONT SANS EFFETS. ELLE N'EST PAS TOXIQUE VIS-A-VIS DES CELLULES MCF-7 DEPOURVUES DU RECEPTEUR.BESANCON-BU Sciences Staps (250562103) / SudocSudocFranceF