Régulation de la gamma-glutamyltransférase humaine et effet de sa surexpression sur la cytotoxicité des anticancéreux dérivés du platine

La y-glutamyl transferase (GG1) est une enzyme clé dans le métabolisme du giutathion (GSH),mais malgré son importance physiologique, les mécanismes de régulation de la GGT humaine sont très malconnus à cause de la complexité de son organisation génomique.Le premier objectif de notre travail était l'étude de la régulation du gène l (seul gène codant pour une protéine active) dans différentes lignées cellulaires. Nous avons montré qu'en réponse au TP A, aubutyrate de sodium, ou au TNFa, les modulations globales des 3 messagers issus du gène l (ARNm IA, IB eIc) reflètent la modulation de l'activité GGT. Cependant ces 3 ARNm sont régulés de manière indépendante et spécifique de la lignée considérée. Ces résultats montrent que les 3 ARNm issus du gène l sont probab1ement transcrits à partir de promoteurs indépendants, régulés différemment selon le modèlecellulaire. Nous avons ensuite étudié la régulation du promoteur B (dirigeant la transcription de l'ARNm IB)de la GGT humaine (seul promoteur décrit à l'heure actuelle) et nous avons montré que ce promoteur est induit par le TP A dans 2 lignées cellulaires. Cette induction passe par la fixation du facteur AP1 (composé d'une sous unité cJun au moins) à l'un des 3 sites AP1 proximaux étudiés. Nous avons également montré que 1es séquences situées en amont de ces sites AP1 sont impliquées dans la modulation de l'induction par le TP A et dans sa spécificité cellulaire.Enfin, nous avons localisé, cloné et partiellement caractérisé un nouveau promoteur sur le gène l humain de la GGT : celui qui dirige la transciption des ARNm Ic. Le second objectif de notre travail était de déterminer le rôle de la GGT dans la réponse cellulaire au cisplatine (CDDP) et au carboplatine, couramment utilisés en chimiothérapie. Nous avons montré qu'une des réponses rapides des cellules HeLa à un traitement par l'un de ces agents résulte en une induction du taux de GSH intracellulaire et de l'activité GGT ce qui laisse supposer un rôle important pour la GGT dans la réponse aux dérivés du platine. Nous avons utilisé une lignée HeLa isogénique, transfectée par l'ADNc de la GGT humaine (HeLa-GG1) qui expriment l'enzyme à un niveau 10 fois supérieur à celui de la lignée parentale HeLa. Cette lignée a permis de montrer que les cellules HeLa-GGT possèdent une résistance accrue aux CDDP et au carboplatine lorsque du GSH extracellulaire est fourni aux cellules. Dansle cas du carboplatine, la résistance est directement corrélée au taux de GSH intracellulaire. En revanche, le contenu intracellulaire en GSH ne semble pas être un facteur déterminant pour la réponse au CDDP dans notre modèle. En effet, les cellules HeLa cultivées dans un milieu complet possèdent un fort taux de GSHb intracellulaire et lorsque le milieu de culture est appauvri en cystéine elles perdent plus de 80 % de leur pool (indépendamment de leur activité GGT). Or, la cytotoxicité du CDDP est comparable dans ces deux conditions de culture. Afin d'expliquer la plus grande résistance des cellules HeLa-GGT au CDDP lorsque du GSH extracellulaire est fourni, nous avons étudié le catabolisme du GSH par la GGT au niveau extracellulaire. Nous avons alors montré que le CDDP est capable d'interagir avec le produit de dégradation du GSH par la GGT : la CysGly. Ce composé est d'ailleurs plus réactif que le GSH et il forme des adduits avec le CDDP 10 fois plus rapidement que le GSH. Nous avons également été capables de détecter cet adduit dans 1e milieu extracellulaire des cellules HeLa-GGT incubées en présence de CDDP et de GSH. Nous suggérons que ce mécanisme dépendant de la GGT pourrait être impliqué dans la résistance des ceUules au CDDP en diminuant la quantité de CDDP disponible et/ou sa toxicité.NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF