Identification et caractérisation d'un locus génique de Corynebacterium glutamicum qui détermine une étape essentielle à la biosynthèse d'un lipoarabinomannane

Nous avons entrepris la construction de mutants du locus -pgsA-htrB-pimA des espèces C. glutamicum ATCCl3032 et Corynebacterium sp 2262 (reclassifiées comme C. glutamicum Or2262). Deux gènes de ce locus, pgsA et pimA sont, chez Mycobacterium tuberculosis, des gènes essentiels pour la survie, et impliqués dans la biosynthèse de lipoarabinoyl mannane (LAM), un important déterminant de pathogénicité de cet organisme. Nous avons réussi à construire des mutants htrB et pimA chez C. glutamicum. Ces mutants montrent une perméabilité altérée aux antibiotiques chloramphénicol, érythromycine, et kanamycine. Le mutant pimA de C. glutamicum Or2262 est dépourvu de LAM et des dérives mannosylés (PIMs) du phosphatidyl myo-inositol qui sont des précurseurs biosynthétiques obligés du LAM. Les effets de l'absence de pimA dans la perméabilité sont attribués au moins en partie - à la participation directe des PIMs et du LAM dans l'intégrité de la barrière de perméabilité de C. glutamicum. Nos tentatives de construction de mutants du gène pgsA ont été sans succès, en révélant néanmoins un aspect jusqu'alors inconnu de la recombinaison chez C. glutamicum.Mutants carrying insertions on the C. glutamicum genes pimA and htrB were constructed. These genes belong to a cluster that respectively present a strong homology to genes of the cluster Rv2612c, Rv2611c, and Rv2610c of Mycobacterium tuberculosis H37Rv. The loci Rv2612c, and Rv2610c encode respectively for the essential proteins PgsA and PimA, involved in the biosynthesis of the envelope constituents: phosphatidyl , myo-inositol mannosides (PIMs), lipomannane (LM), and ultimately, of lipoarabinoyl mananne (LAM). The C. glutamicum mutants htrB (presumably encoding for an acyl transferase) and pimA (encoding for a glycosyl transferase) show an altered permeability to the antibiotics; the pimA mutant is also deficient for growth in glucose as unique carbon source. The pimA mutant is deficient in the synthesis of the corynebacterial forms of PIM and LAM, but make normal amounts of a compound undistinguishable of the corynebacterial form of LM. In mycobacteria LM is an obligate biosynthetic intermediary between PIM and LAM. We discuss the consequences of these findings in the rapidly evolving view of the Corynebacterial envelope.ORSAY-PARIS 11-BU Sciences (914712101) / SudocSudocFranceF