Clonage et caractérisation de deux gènes codant des récepteurs transmembranaires à activité kinase chez Cichorium intybus L. (expression au cours des phases précoces de l'embryogenèse somatique et du développement de la graine)

L'embryogenèse somatique est le processus par lequel des.cellules somatiques, après une phase de dédifférenciation, se redifférencient pour former un embryon, présentant des caractéristiques morphologiques semblables à celles d'un embryon zygotique. Certains génotypes de chicorée ont la capacité à produire des embryons somatiques d'origine unicellulaire et directe ce qui en fait un bon modèle pour l'étude des phases précoces de l'induction de l'embryogenèse somatique, lorsque les cellules différenciées se dédifférencient pour acquérir la compétence embryogène. SERK (Somatic Embryogenesis Receptor-like Kinase) est un gène qui a été mis en évidence initialement chez la carotte et dont l'expression marque la compétence embryogène des cellules dédifférenèiées. Ce gène a par ailleurs été également mis en évidence au cours des phases précoces de l'embryogenese zygotique. Il code un récepteur transmembranaire à activité sérine/thréonine kinase. Lors de ce travail, nous nous sommes proposés d'identifier chez la chicorée des gènes apparentés à SERK et d'étudier leur implication potentielle au cours des phases précoces de l'embryogenèse somatique ainsi que lors de l'embryogenèse zygotique. Deux gènes (CiSERK1 et CiSERK2) ont ainsi été mis en évidence. Les protéines déduites montrent une forte identité de séquence avec les séquences de SERK de carotte et d'Arabidopsis.L'étude de l'expression des produits de ces gènes au cours de l'embryogenèse somatique de génotypes embryogène et non embryogène ainsi que lors de l'embryogenèse zygotique a été réalisée selon deux approches. Une analyse de la variation des niveaux.de transcrits a été réalisée par RT-PCR en temps réel. Parallèlement, l'accumulation de protéines a été suivie après obtention et purification d'anticorps polyclonaux dirigés contre le domaine kinase de CiSERK1. Les résultats indiquent que l'expression des gènes identifiés chez la chicorée n'est pas induite au cours des phases précoces de l'embryogenèse somatique. Le gène CiSERK2 ne présente pas de variation de son profil d'expression quel que soit le type d'embryogenèse. Le niveau de transcrits de CiSERK1 diminue au cours de la première demi-journée de culture en conditions embryogènes indépendamment du génotype. Au cours de l'embryogenèse zygotique, le niveau de transcrits de CiSERK1 augmente au stade cotylédonaire. L'approche immunologique a permis de détecter plusieurs protéines au cours de l'induction de l'embryogenèse somatique dont 2 (75 kDa et 62 kDa) sont accumulées de façon corrélée à des états cellulaires caractéristiques de l'induction de l'embryogenèse somatique. Au cours de l'embryogenèse zygotique, plusieurs protéines ont été détectées .dont une de 62 kDa qui s'accumule au cours du développement de l'embryon. .LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF