Contribution à l'étude structure/fonction du facteur de transcription TFIIH

Le facteur TFIIH est un facteur multi-protéique impliqué, via ses dix sous-unités, dans la transcription des gènes de classe II et dans la réparation de l'ADN. Chez l'homme, des mutations dans les gènes codant pour des hélicases XPB et XPD de TFIIH sont à l'origine de trois maladies: le Xeroderma Pigmentosum, la Trichothiodystrophie et le Syndrome de Cockayne. Au cours de mes études doctorales, je me suis intéressée aux liens entre la structure et la fonction du facteur TFIIH humain. Nous avons observé le complexe TFIIH produit sous forme recombinante dans les cellules d'insectes en microscopie électronique et sa structure est identique à celle du facteur endogène. Nous y avons ensuite intégré les données biochimiques d'interaction protéine-protéine et nous proposons un modèle général de l'architecture du complexe. Afin de comprendre le rôle de TFIIH dans l'initiation de la transcription ou dans la réparation de l'ADN, nous avons développé une nouvelle technologie visant à observer les complexes ADN-protéine en microscopie. Nous avons également déterminé un modèle en cryomicroscopie du facteur TFIIE, qui interagit physiquement avec TFIIH, à une résolution de 1.6nm. Finalement, nous avons obtenu des cristaux de l'homologue de l'hélicase XPD chez une archaebactérie.TFIIH is a general transcription factor involved in class II gene transcription as well as nucleotide excision repair. In human, mutations in both helicases of TFIIH, XPD and XPB, are directly incriminated in three diseases: the Xeroderma Pigmentosum, the Cockayne Syndrome and trichothiodystrophie.During my PhD studies, I have been interested in the structure and function relationships of the TFIIH human factor. We have characterized the recombinant TFIIH complex in electronic microscopic and its structure was identical to the endogenous one. We have used this structure to dock the biochemical informations obtain by protein-protein interaction studies and we propose a general model of the molecular organization of the human TFIIH. Finally a study aimed to put TFIIH with natural substrates, DNA or partners, was done. I was implicated in the development of a new technology designed to immobilize DNA on a solid support suitable for electron microscopy observation. We also reconstruct a cryo-negative staining model of TFIIE, which interacts physically with TFIIH, at 1.6nm resolution. Finally, we obtain 3D crystals of the homologue of XPD helicase in an archaebacteria.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF