Rôle de l'oxydase alternative et des radicaux libres dans le contrôle de la longevité chez Podospora anserina

L'inactivation du complexe IV de la chaîne respiratoire mitochondriale accroît considérablement la longévité de P. anserina, réduit nettement le niveau énergétique et le taux de radicaux libres (mutant respiratoire cox5::ble). Cette augmentation de longévité pourrait avoir diverses origines, et notamment un faible taux de radicaux libres diminué grâce à l'utilisation exclusive de l'oxydase alternative (AOX) et à ses propriétés antioxydantes éventuelles.La première approche de ma thèse consistait à évaluer les propriétés antioxydantes de l'AOX et son implication dans le contrôle de la longévité. J ai ainsi montré que l AOX n'a pas de rôle antioxydant dans nos conditions standard de culture, et qu elle n'est pas un déterminant de la longévité. Par contre, la surexpression de l AOX chez le mutant cox5::ble conduit à une amélioration notable du bilan énergétique associée à une restauration systématique de la sénescence et une augmentation du niveau de radicaux libres, ce qui met en évidence le rôle majeur du métabolisme énergétique dans le contrôle de la longévité.La seconde approche de ma thèse consistait à caractériser de nouveaux acteurs impliqués dans le contrôle de la longévité, par la caractérisation de suppresseurs de la très grande longévité de mutants respiratoires. Le gène suppresseur rse2 améliore le bilan énergétique, augmente la production de radicaux libres et restaure concomitamment la sénescence. Ce gène semble impliqué dans la régulation de l'expression de l'AOX, mais les études menées jusqu'à présent semblent exclure que ce suppresseur soit une mutation du gène aox. Afin de caractériser plus précisément le suppresseur rse2, son clonage a été entrepris.Inactivation of complex IV of the mitochondrial respiratory chain considerably extends lifespan of P. anserina, markedly decreases energy and ROS levels (respiratory mutant cox5::ble). This lifespan extension could result from various modifications, and notably from a low level of ROS decreased thanks to the exclusive use of the alternative oxidase (AOX) and its hypothetical antioxidant properties.The first approach of my thesis was to evaluate antioxidant properties of AOX and its hypothetical role in the control of longevity. I have shown that AOX has no antioxidant properties in stantard conditions, and that it is not a longevity determinant. Overexpression of AOX in the cox5::ble mutant leads to an improvement of the energy level associated with a systematic restoration of senescence and an increase of ROS level, what points out a major role of energetic metabolism in the control of longevity.The second approach of my thesis was to characterize new actors of the control of longevity by the characterization of suppressors of the long-lived respiratory mutants. The rse2 suppressor gene improves energy level, increases ROS production and at the same time restores senescence. This gene seems to be implicated in the regulation of AOX expression, but studies done so far seem to exclude that this suppressor could be a mutation of the aox gene. In order to characterize more precisely the rse2 suppressor, its cloning has been undertaken.ORSAY-PARIS 11-BU Sciences (914712101) / SudocSudocFranceF