Etude des protéines membranaires de racines de Medicago truncatula colonisées par le champignon mycorhizogène Glomus intraradices (développement et application d'approches de protéomique sub-cellulaire)

La symbiose mycorhizienne à arbuscules (MA) est caractérisée, au stade fonctionnel, par la formation de structures fongiques dichotomiques à l'intérieur des cellules corticales de la racine : les arbuscules. Ceux-ci sont entourés par une membrane périarbusculaire, dérivée du plasmalemme. Afin de rechercher des protéines reliées à la symbiose MA, notamment à cette membrane périarbusculaire, deux stratégies de protéomique sub-cellulaire ciblées sur les protéines membranaires ont été développées. La première a été dirigée sur les protéines extrinsèques de membranes des racines de Medicago truncatula, extraites des microsomes par un mélange de chloroforme/méthanol et analysées par électrophorèse bi-dimensionnelle. La seconde stratégie a été ciblée sur les protéines de racines de la membrane plasmique enrichies par un gradient discontinus de saccharose et analysées par des approches alternatives à l'isoélectrofocalisation afin d'avoir accès aux protéines intrinsèques des membranes. Les analyses comparatives des extraits de racines inoculées ou non par le champignon MA Glomus intraradices ont permis de mettre en évidence et d'identifier des protéines différentiellement exprimées lors de la symbiose MA dont certaines sont potentiellement localisées sur la membrane périarbusculaire.Arbuscular mycorrhizal (AM) symbiosis is characterized, at the functional stage, by particular dichotomic fungal structures within the root cortical cells : the arbuscules. They are surrounded by an enlarged plant plasma membrane called periarbuscular membrane. In order to reveal AM symbiosis related-proteins, including those of this periarbuscular membrane, two sub-cellular proteomic strategies targeted on membrane proteins have been developed. The first was directed to extrinsic membrane proteins of Medicago truncatula roots, extracted from microsomal fractions by a chloroform/methanol process and analyzed by two-dimensional gel electrophoresis. The second strategy was targeted to root proteins belonging to the plasma membrane enriched using a discontinuous sucrose gradient. Analyses were performed by an alternative approach to isoelectrofocalisation to give access to membrane intrinsic proteins. Comparative analyses between extracts from roots inoculated or not with G. intraradices have allowed to reveal and identify differentially-display proteins during AM symbiosis, among which some are potentially localized on the periarbuscular membrane.DIJON-BU Sciences Economie (212312102) / SudocSudocFranceF