Etude de la fonction de la sous-unité d'intégrine a6 dans les cellules de peau

Les intégrines sont les principaux récepteurs de la matrice extracellulaire. Les souris a6-/- meurent à la naissance et présentent un décollement généralisé de l'épiderme, dû à une absence d'hémidesmosomes dans les tissus mutants. Afin d'analyser plus précisément la fonction d'a6 dans la peau, nous avons généré des lignées de kératinocytes immortalisés de manière conditionnelle, à partir d'embryons de souris a6+/- et a6-/-. Les cellules mutantes adhèrent moins bien sur laminine 5, le composant majeur de la lame basale dans la peau, et sur les laminines 10/11 et 2. Des expériences de puces à ADN ont révélé que l'expression de différentes familles de gènes est modifiée dans les cellules mutantes: protéines de la matrice extracellulaire (laminine 5), molécules d'adhérence (intégrine b4 ou collagène XVII), ou des voies de signalisation (les protéines de la famille TGFb . Nous avons également observé une augmentation de l'expression des marqueurs de la différentiation épidermique dans les tissus mutants. Notre hypothèse est que ces altérations pourraient être liées à une surexpression de la voie TGFb/Jun/Fos dans les kératinocytes a6-/-. Nous avons enfin réalisé une étude structure/fonction d'a6. Pour cela nous avons transfecté de manière stable les lignées de kératinocytes mutants avec les isoformes a6A et a6B. L'analyse de nos lignées cellulaires a révélé que la sous-unité d'intégrine b4 s'accumule dans le réticulum endoplasmique où elle colocalise avec la calnexine lorsque son partenaire a6 est absent, alors qu'elle est transportée à la membrane plasmique d' a6A mais aussi ' a6B. Les propriétés d'adhérence des cellules transfectées par a6B sont cependant altérées sur les substrats de laminine testés précédemment.Integrins are major receptors for the extracellular matrix. a6-/- mice die at birth with a severe skin blistering, due to a total absence of hemidesmosomes in mutant cells. To further study the function of a6 in the skin, we generated conditionally immortalized cell lines from the epidermis of a6+/- and a6-/- mouse embryos. Mutant cells present a decreased adhesion on laminin 5, the major component of the basement membrane in the skin, and on laminin 10/11 and 2. A DNA array analysis revealed alteration in the expression of different families of genes, such as extracellular matrix components (laminin 5), membrane receptors (b4 integrin or collagen XVII) or signalling molecules (TGFb family of proteins). An increase of several epidermal differentiation markers is observed in mutant tissues. Our hypothesis is that this may be linked to an up-regulation of the TGFb/Jun/Fos pathway in a6-/- keratinocytes. We finally studied the function of the cytoplasmic tail of a6 by analysing the behaviour of our a6-/- keratinocytes transfected with either the a6A or the a6B isoform. Results revealed that b4 integrin accumulates in the endoplasmic reticulum where it colocalizes with calnexin when a6 is missing, while it is translocated at the plasma membrane in presence of either a6A or a6B. Adherence properties of mutant cells transfected with a6B are however still altered.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF