Etude des mécanismes d'activation et de cytoprotection des cellules endothéliales (rôle de l'inhibiteur tissulaire de métalloprotéases TIMP-1 et de la protéine adaptatrice Ln)

Les dysfonctions de l'endothélium sont impliquées dans de nombreuses pathologies vasculaires et inflammatoires incluant le choc septique, les maladies auto-immunes, l'athérosclérose et le rejet de greffes. Par conséquent, mieux définir les mécanismes moléculaires impliqués dans l'activation des cellules endothéliales (CE) et les voies de signalisation empruntées permettrait d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques pour contro ler les dysfonctions endothéliales, en particulier dans un contexte de transplantation d'organes. Dans ce but, nous avons cherché à définir le rôle de deux molécules, l'inhibiteur de métalloprotéases TIMP-1 et la protéine adaptatrice Lnk, dans le contrôle de l'apoptose et de l'activation des CE humaines induites par le TNFalpha. Tout d'abord, nous avons montré le rôle protecteur de TIMP-1 dans les CE contre l'apoptose induite par le TNFalpha Cette protection semble indépendante du facteur de transcription NFkappaB et des protéines pro- et anti-apoptotiques bad et bcl2. En revanche, dans les CE, TIMP-1 protège de l'apoptose via l'activation des voies PI3-K/Akt et des p42 et 44 MAPK associée à l'activation de la NOS endothéliale responsable de la production de monoxyde d'azote (NO). Puis, nous avons montré l'expression et la régulation de la protéine adaptatrice Lnk dans les CE activées par le TNFalpha. L'analyse de la fonction de Lnk dans les CE révèle un rôle dans la régulation négative de la voie d'activation du TNFalpha via l'inhibition des p42-44 MAPK. En parallèle, Lnk active aussi la voie de signalisation de la PI3-K/Akt conduisant à l'expression de HO-1 et à l'activation de eNOS, deux protéines aux propriétés anti-inflammatoires. De plus, Lnk joue un rôle dans l'organisation du cytosquelette d'actine et dans la formation des adhésions focales, structures impliquées dans la migration, la prolifération et la survie des CE. L'ensemble de ces travaux a mis en évidence dans les CE un rôle cytoprotecteur de TIMP-1 et a permis l'identification de Lnk comme un régulateur de la signalisation intracellulaire impliquée dans l'inflammation, la prolifération et l'apoptose. Ces travaux soulignent également l'importance des voies de la PI3-Kinase et des p42-44 MAPK dans ces mécanismes.Endothelial dysfunctions are implicated in many vascular pathologies and inflammatory diseases including sepsis, autoimmunity, atherosclerosis and graft rejection. Consequently, defining molecular mechanisms and signalling pathways implicated in endothelial cell (EC) activation will enable new therapeutic targets to be defined to control endothelial activation, especially in transplantation. To this end, we defined the role of two molecules; the tissue inhibitor of metalloproteases TIMP-1 and the adaptor protein Lnk, in the control of endothelial apoptosis and activation induced by TNFalpha. Firstly, we showed the cytoprotective role of TIMP-1 in EC against TNF-dependent apoptosis. This effect is independent of the activation of the transcription factor NFkappaB and the pro and anti-apoptotic proteins bad and bcl2. However, TIMP-1 protects EC via PI3-K/Akt and p42-44 MAPK signalling activation and is associated with endothelial NOS activation, an enzyme responsible for nitric oxide (NO) synthesis. We subsequently investigated the expression and regulation of the adaptor protein Lnk in EC activated by TNFalpha. Functional analysis of Lnk in EC revealed a negative regulatory role in the TNF-activation pathway via p42-44 MAPK inhibition. In parallel, Lnk activates the PI3-K/Akt pathway that is responsible for HO-1 expression and eNOS activation, two proteins with anti-inflammatory properties. Furthermore, Lnk plays a role in actin-cytoskeleton organisation and in focal adhesion formation, structures implicated in EC migration, proliferation and survival. Altogether, these results highlight a cytoprotective role for TIMP-1 in EC and identify Lnk as a regulator in intracellular signalling in EC implicated in inflammation, proliferation and apoptosis. This study also underlines the importance of the PI3-K/Akt and p42-44 MAPK pathways in these mechanismsNANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF