Etudes de la voie de signalisation dépendante de Ras (I- validation de la protéine adaptatrice Grb2 comme cible anti-tumorale II- caractérisation d'un nouvel effecteur de Ras-GAP : la sous-unité régulatrice des calpaïnes ubiquitaires)

Notre étude porte sur l'adaptateur Grb2, situé entre HER2 et Ras. Un peptide, nommé peptidimère-c, bloquant les deux domaines SH3 de Grb2 inhibe la formation de colonies de cellules HER2+ et présente un effet synergique avec le docetaxel. Ce dernier induit l'activation de la voie HER2, expliquant cette synergie. Ces résultats sont confirmés in vivo, sur des xénogreffes humaines sur souris nude. Cette étude valide Grb2 comme cible anti-tumorale et un test de criblage a été mis au point dans le but d'identifier de nouveaux inhibiteurs. D'autre part, nous caractérisons la sous-unité régulatrice des calpaïnes comme interagissant avec la protéine Ras-GAP. L'interaction a été montrée dans des cellules tumorales humaines exprimant Ras oncogénique et la co-localisation des protéines RasGAP, calpaïnes et FAK, substrat des calpaïnes, aurait un rôle dans le renouvellement des plaques focales d'adhésion. Ras-GAP serait ainsi un adaptateur localisant les calpaïnes à proximité de leur substrat.Grb2 is an adaptor protein between Ras and HER2 receptor. An inhibitor of the two SH3 domains of Grb2, called peptidimer, inhibits the colony formation of HER2 human cancer cells and synergizes docetaxel-induced effects. We show that docetaxel treatment induced an increase an HER2 expression, explaining the synergistic effect. These results are confirmed in vivo, in human tumor xenograft established in nude mice. Our findings validate Grb2 as an anti-tumor target. We developed a screening test to identify new Grb2 SH3 domain inhibitors. Moreover, we identified a new RasGAP SH3 domain-binding protein: the small regulatory subunit of ubiquitous calpain (capns). RasGAP and capns interact in cancer cells expressing oncogenic Ras. We also demonstrate that RasGAP, capns and FAK, known as a calpain substrate, co-localize at the plasma membrane. We suggest that RasGAP plays a role of adaptor in order to localize calpain close to FAK, to induce focal adhesion complex turnover.PARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF