Mise en place d'un système spécifique de l'expression d'un transgène plastidial

Mon travail a visé à mettre au point un système permettant l'expression dans les chloroplastes d'une protéine à haute valeur ajoutée, de manière spécifique et contrôlée. Pour cela, la réalisation d'une double transformation (nucléaire et plastidiale) a été envisagée. Une première avancée dans ce domaine a été réalisée en 1994 par la mise en place d'un système impliquant l'ARN polymérase T7 (McBride et al., 1994). L'originalité de mon travail réside en l'utilisation du système transcriptionnel propre au chloroplaste, en le re-programmant en quelque sorte, pour le forcer à transcrire, lorsque l'ordre lui en serait donné, un gène d'intérêt. La cible de cette re-programmation est le système transcriptionnel PEP et le moyen du re-programmation est un facteur sigma chimérique (hybride) ayant une spécificité de reconnaissance pour un promoteur absent du génome plastidial normal. Des plantes de tabac transplastomiques contenant la construction E- YFP reconnue par le facteur hybride après transformation plastidiale ont été régénérées. Elles ont été ensuite agro-infiltrées par la construction contenant le facteur sigma hybride. Des résultats préliminaires indiquent une faible expression du gène rapporteur dans des structures associées à des chloroplastes.D'autre part, afin de pouvoir tester in vitro les interactions du facteur sigma hybride avec la PEP core, un système de transcription utilisant l' ARN polymérase PEP a été mis au point.GRENOBLE1-BU Sciences (384212103) / SudocSudocFranceF