Croissance et différenciation du trophoblaste de mammifères en début de gestation (étude par génomique fonctionnelle de l'embryon bovin normal et cloné)

Avec la masse cellulaire interne, le trophoblaste est l'un des tout premiers types cellulaires qui se différencie dans l'embryon de mammifères. On lui reconnaît un rôle important lors de l'implantation et de la formation du placenta mais on sait peu de choses, chez les ruminants, sur ses interactions avec les tissus embryonnaires, sa capacité à s'allonger de plusieurs dizaines de centimètres en moins de 2 semaines ou sur les perturbations introduites dans ces processus par les biotechnologies de l'embryon (fécondation in vitro ou " clonage " par transfert de noyau somatique). Le choix de situations biologiques multiples (trophoblaste bovin en cours d'élongation, à différents stades, suite à un développement in vivo ou in vitro) et de l'analyse globale du transcriptome de ce tissu, nous a conduit à développer les outils moléculaires et statistiques appropriés (réseaux d'ADNc dédiés, protocoles d'amplification moléculaire, modules statistiques d'analyse de la variance) et nous a apporté des résultats novateurs. Parmi eux : la mise en évidence d'un programme de différenciation trophoblastique propre aux ruminants, la notion d'une coordination étroite entre les tissus embryonnaires et extra embryonnaires lors d'un développement normal (coordination perturbée ou rompue lors d'un développement après clonage) ou la visualisation dans les tissus embryonnaires et extra embryonnaires au-delà du stade blastocyste de perturbations géniques plus ou moins importantes, liées au génotype des cellules fibroblastiques donneuses de noyau. En conclusion, ces travaux ont confirmé l'intérêt du modèle bovin pour étudier le développement du trophoblaste indépendamment de l'implantationTogether with the inner cell mass, the trophoblast is one of the first cell types which differentiate in the mammalian embryo. One recognizes its role as important at the time of implantation and placenta formation but in ruminants, little is known on its interaction with embryonic tissues, its ability to elongate of tens of centimetres in less than 2 weeks or on the disturbances introduced into such processes by embryo biotechnologies (in vitro fertilization or "cloning" by nuclear somatic transfer). Our choice to use multiple biological situations (elongating bovine trophoblast at different stages following an in vivo or in vitro development) and use of a global approach to study trophoblast transcripts, led us first to develop appropriate molecular and statistical tools (dedicated cDNA array, molecular amplification protocols, statistical modules for the analysis of variance) but brought innovative results. Among them: the molecular evidence for a specific differentiation program of ruminant trophoblast, the concept of close coordination between embryonic and extra embryonic tissues when normal development is ongoing (coordination disrupted when development is initiated after cloning) or signs of disturbances in gene expression profiles beyond the blastocyst stage in embryonic and extra embryonic tissues - in relation to the genotype of the fibroblast donor cells. As a conclusion, this work has reinforced our interest in the bovine model to study trophoblast development independently of implantation processesVERSAILLES-BU Sciences et IUT (786462101) / SudocSudocFranceF