Impact des mutations OPG chez Erwinia chrysanthemi (recherche de suppresseurs et analyse protéomique des mutants)

Erwinia chrysanthemi est une entérobactérie phytopathogène pectinolytique faisant partie de la subdivision g des protéobactéries. Elle infecte un large spectre de plantes hôtes engendrant la pourriture molle. L'apparition de cette pourriture molle dépend de la synthèse et de la sécrétion d'une batterie d'exoenzymes (cellulases, protéases et pectate-Iyases) capable de dégrader les composants de la paroi des cellules végétales. Néamnoins, l'expression de nombreux autres gènes est nécessaire à la virulence de cette bactérie. En effet, les mutants déficients en glucanes périplasmiques osmorégulés (OPG) d'E. chrysanthemi sont totalement non virulents. Les OPG sont constitués de 5 à 12 résidus de glucose liés en b,1-2, branchés en b,1-6 et sont d'autant plus abondants que l'osmolarité du milieu est faible. Ces mutants présentent un phénotype pléïotrope: ils sont hypersensibles aux sels biliaires, la synthèse d'exopolysaccharides est augmentée, la synthèse et la sécrétion d"exo-enzymes ainsl que la motilité sont réduites. Un phénotype similaire, mais atténué, est observé chez les mutants du système ToI. Les OPG comme les protéines ToI apparaissent nécessaires au maintien de l'intégrité de l'enveloppe. Des mutations suppressives restaurant la motilité des mutants opg ont été isolées. Elles rétablissent l'essentiel du phénotype sauvage (virulence sur tubercules de pommes de terre, sécrétion des exo-enzymes, résistance aux sels biliaires, colonies redevenues non muqueuses et motilité, à l'exception de la virulence sur feuille d'endive). Une des mutations identifiées rcsC2 supprime également les phénotypes des mutants toI.Cette mutation rcsC2 affecte un système capteur-régulateur rcsBCD impliqué dans la régulation de gènes cibles en réponse à un ou des signaux de nature inconnue et nécessaire au pouvoir pathogène des bactéries chez les animaux et chez les plantes. Les fonctions des gènes cibles régulés par ce système, correspondent pour une grande part aux fonctions altérées par l'absence d'OPG chez E. chrysanthemi. Ces résultats nous laissent penser que les OPG pourraient être une des molécules captées par le système RscBCD. De plus, en parallèle à cette étude, une analyse protéomique comparative du mutant opgG par rapport à la souche sauvage d'E. chrysanthemi, nous a permis de mettre en évidence une altération importante des fonctions cellulaires allant des structures de l'enveloppe qui était notre seule hypothèse quant à l'impact de l'absence d' OPG, mais nous constatons également une altération d'expression des protéines du métabolisme énergétique, de certains systèmes de transport et de protémes impliquées dans la dégradation et la conformation des protéines souvent induites en réponse à divers stress. L'ensemble de ces résultats nous laisse penser que les OPG pourraient être des molécules captées par un jeu de systèmes à deux composants afin de permettre à la bactérie de répondre à une multitude de stress rencontrés dans l' environnement.LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF