Culture de cellules épithéliales non parenchymateuses isolées à partir de foies humains adultes et différenciation vers l'hépatocyte (une nouvelle composante cellulaire pour la biothérapie et les études de pharmaco-toxicologue ?)

Les cultures primaires d'hépatocytes humains hautement différenciés sont largement utilisées pour les études de physiopathologie hépatique et de métabolisme des xénobiotiques. Dans la première partie de cette thèse, nous montrons que les composés anti-fongiques kétoconazole et miconazole sont des antagonistes du récepteur des glucocorticoïdes et provoquent une diminution de l'expression des xénorecepteurs CAR et PXR qui contrôlent l'expression des enzymes du métabolisme des médicaments de phase I, II et III. Ces résultats indiquent que ces molécules connues pour être des inhibiteurs fonctionnels des CYPs, peuvent aussi inhiber la transcription des gènes impliqués dans la détoxication. Les besoins actuels en hépatocytes humains normaux et différenciés sont grandissant à la fois pour la recherche académique et industrielle, mais aussi pour le développement de la biothérapie hépatique. Pour cette raison, l'objectif principal de cette thèse était de développer les conditions d'isolement, d'amplification et de différenciation en hépatocyte des progéniteurs ou des cellules souches intra et extra-hépatiques. Dans ce but, nous nous sommes brièvement intéressés au potentiel de différenciation hépatique des cellules mononuclées de sang de cordon ombilical ou périphérique. Puis nous nous sommes focalisés sur l'utilisation des progéniteurs intra-hépatiques adultes. Nous avons établi les conditions d'isolement et de culture de long terme d'une population cellulaire épithéliale non parenchymateuse isolée à partir de foies humains adultes. In vitro, ces cellules se différencient vers l'hépatocyte et adoptent un phénotype intermédiaire fœtal/adulte. Dans le futur, ces cellules pourraient constituer une alternative aux hépatocytes adultes pour la biothérapie et les recherches académiques et industrielles.Highly differentiated human hepatocyte primary cultures are widely used in hepatic physiopathology and drug metabolism studies. In the first part of this thesis, we have shown that anti-fungi compounds ketoconazole and miconazole antagonize the glucocorticoid receptor. This inhibitory activity elicits decreased expression of CAR and PXR xenoreceptors implicated in the transcription control of phase I, II and III drug metabolism enzymes. These results show that, in addition to their well know inhibitory effect on CYP enzyme activities, ketoconazole and miconazole also inhibit the expression of genes involved in drug metabolism. Currently, normal and differentiated human hepatocytes availability is not sufficient to respond to researches activities, and liver biotherapy increase request. For this reason, the first aim of this thesis was to develop the culture and differentiation of human intra and extra-hepatic stem cells, or progenitors in hepatocyte-like cells. In this objective, as a cell source, we first investigated in adult and blood cord hematopoeitic stem cell differentiation. Then, we have focused our attention on human hepatic adult progenitor cells. We described the condition for the isolation and the long term culture of non parenchymal epithelial cells isolated from adult human livers. In vitro, these cells differentiate to hepatocyte-like cells and adopt an intermediary fetal/adult hepatic phenotype. In the future, these cells may constitute an attractive alternative to human adult hepatocytes for biotherapy, and the academic and industrial researches.MONTPELLIER-BU Sciences (341722106) / SudocSudocFranceF