La biosynthèse des glucanes périplasmiques osmorégulés (de la démonstration des gènes impliqués chez Pseudomonas aeruginosa à l'analyse structurale de protéines impliquées chez Escherichia coli)

Chez Erwinia chrysanthemi, Pseudomonas syringae et Escherichia coli, l'opéron opgGH code les deux protéines indispensables à la synthèse des OPG. Une première approche a permis de montrer que c'est le locus opgGH et non le locus ndvB qui est responsable de la synthèse des OPG chez Pseudomonas aeruginosa, L'absence d'OPG perturbe la formation des biofilms. Les OPG de P. aeruginosa sont constitués de 5 à 10 résidus de glucose formant un squelette linéaire lié en b-1,2 avec des branches liées en b-1,6. Ces OPG sont très semblables à ceux trouvés chez E. coli, Chez cette bactérie OpgH, une glucosyltransférase de type 2 située dans la membrane interne, catalyse la biosynthèse du squelette linéaire à partir de l'UDP-glucose OpgG, une protéine périplasmique, interagirait avec OpgH pour la synthèse du squelette et aurait un rôle dans la formation des branches. Chez E. coli, OpgD, le produit d'un paralogue d'opgG, contrôlerait la machinerie de biosynthèse des OPG. Les mutants opgG ne forment plus d'OPG, les mutants opgD ont des OPG de structure altérée. Etant donné les fortes similitudes dans leur séquence primaire, nous avons entrepris de cristalliser OpgG et OpgD afin de mettre en évidence des différences structurales pour comprendre le rôle de ces deux protéines. Les cristaux d'OpgD obtenus diffractent avec une trop faible résolution pour obtenir une carte de densité électronique. La structure tridimensionnelle d'OpgG (établie par Hanoulle et al. en 2004) et les stratégies de mutagenèse localisée, dirigée et de délétion menées dans ce travail ont permis de montrer qu' OpgG interagit avec les autres constituants du complexe enzymatique et participe à la formation des branches.LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF