Contribution à la lutte contre la Péripneumonie contagieuse bovine (typage moléculaire par MLVA et inactivation de gènes chez Mycoplasma mycoides subsp. mycoides Small Colony)

Mycoplasma mycoides subsp. mycoides Small Colony (MmmSC) est l'agent infectieux responsable de la péripneumonie contagieuse bovine (PPCB), une maladie causant des pertes majeures dans les élevages bovins. Alors que le risque de réemergence de cette maladie en Europe est une réalité, celle-ci reste à l'état endémique dans toute la région sub-saharienne de l'Afrique. La compréhension des modes de dissémination de la PPCB est essentielle pour contrôler la maladie. Les outils de typage, ne cessaires au suivi des épidémies, sont pour l'instant insuffisants pour différencier précisément les souches de MmmSC, notamment celles d'origine européenne. Nous avons développé une méthode de typage moléculaire basée sur l'étude de minisatellites polymorphes (MLVA ou Multilocus VNTR Analysis). Trois minisatellites sélectionnés ont permis de répartir un échantiillonnage de 32 souches en 17 groupes. Les 14 souches européennes testées sont réparties en 5 groupes, ce qui représente une amélioration de la sensibilité par rapport aux techniques existantes. La prophylaxie en Afrique repose principalement sur l'utilisation de souches vaccinales atténuées par passages ex vivo. Ces dernières n'apportent qu'une protection limitée dans le temps et induisent parfois des effets secondaires indésirables. En vue de produire de nouveaux vaccins par inactivation de facteurs de virulence, nous avons mis au point une méthode de mutagenèse par transposition. Des banques de données ont été obtenues et l'insertion du transposon dans les gènes d'intérêt a été démontrée. Un mutant n'exprimant plus la lipoprotéine majeure LppQ a été caractérisé. Enfin, une amélioration du transposon utilisé permet maintenant d'envisager la production de mutants n'hébergeant plus de gènes de résistance aux antibiotiques, ouvrant ainsi la voie à l'élaboration de souches vaccinales atténuées par génie génétique.Mycoplasma mycoides subsp. Small Colony ( MmmSC) is the etiologic agent of Contagious Bovine Pleuropneumoniae (CPP), a disease causing important losses in cattle herds. The threat of a re-emergence of this disease is a reality in Europe and CBPP is still endemic in Africa. Understanding how CBPP spreads during an epidemic is essential to control this disease. However, typing tools are inefficient to discriminate precisely between the different strains of MmmSC, especially European strains. We developed a typing method based upon the study of polymorphic minisatellites (MLVA or MultiLocus VNTR Analysis). Three of the identified minisatellites permitted the distribution of the 32 studied strains into 17 groups, and of the 14 European strains into 5 groups. This latter result represents an improved sensitivity of MmmSC typing compared to existing methods. The CBPP prophylaxis in Africa is mainly based upon vaccination, using MmmSC, strains that were attenuated by several passages ex vivo. The protection they afford is too time-limited and induce sometimes severe post-vaccine reactions. To produce new and safer vaccines by inactivating MmmSC virulence determinants, we developed a transposon-based mutagenesis method. Mutant libraries were obtained and the transposon insertion into genes of interest was demonstrated. A mutant, defective in the lipoprotein LppQ, a major antigen, was isolated and characterized.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF