Evaluation d'un modèle alternatif de peau dans l'étude de l'atteinte épidermique après exposition à différents agents de stress environnementaux (rayonnements ionisants (RI) et ultra-violets B (UVB))

La peau humaine est un tissu cible majeur des rayonnements ionisants (RI) et UVB. Nous avons mis au point un modèle d explant de peau et choisi 2 types de kératinocytes NHEK et HaCaT pour étudier la survie et le stress oxydatif induits par ces rayons. Nous avons évalué l atteinte oxydative par mesure des ERO produites et des défenses anti-oxydantes cellulaires induites. Nous avons observé dans la peau irradiée aux RI une modulation de l expression de gènes impliqués dans le contrôle du stress oxydatif, en accord avec la diminution des activités enzymatiques de la catalase, glutathion peroxydase et superoxyde dismutase. Le déséquilibre observé entre l expression des gènes anti- et pro-apoptotiques montre que l apoptose des kératinocytes serait en partie dépendante de la production d ERO radio-induite. Nous avons mis en évidence la différence de radiosensibilité des NHEK et HaCaT qui serait liée à leur réponse oxydante différentielle. De plus, nous avons montré qu au cours de la reepithélisation cutanée, les NHEK activés après RI expriment la kératine 6, relarguent des cytokines pro-inflammatoires et prolifèrent, sans modification de leur différenciation. Le traitement des NHEK avec le geranylgeranylacétone (GGA) a un effet bénéfique sur leur activation radio-induite en augmentant le relargage d IL-1, leur migration dans la zone "scrappée" et leur survie. Le GGA a un pouvoir anti-apoptotique (induction d Hsp70-caspase3) et migratoire (activation de P38/RhoA) sur les NHEK, mais après RI, seules les voies caspase-3 et RhoA sont induites. Ce travail contribue à une meilleure compréhension des dommages cutanés après RI et du mode d action du GGA accélérant la reepithélisationHuman skin is a major target tissue for ionising radiation (IR) and UVB. We developed a skin explant model and used 2 types of keratinocytes to study survival and oxidative stress induced by these radiations. We examined oxidative damages by measuring ROS produced and cellular anti-oxidant defences induced. We observed into skin exposed to IR a modulation of genes expression implied in the control of oxidative stress, confirmed by the decrease of catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase enzymatic activities. The imbalance observed between anti- and pro-apoptotic genes expression shows that keratinocytes apoptosis may be partly dependent on radio-induced ROS production. We showed the difference of radiosensitivity between NHEK and HaCaT, which may be linked to their differential oxidative responses. In addition, during reepithelialization, we demonstrated that activated NHEK after IR express keratin 6, release pro-inflammatory cytokines and proliferate, without modification of their differentiation. Treatment of NHEK with geranylgeranylacetone (GGA) has a beneficial effect on their radio-induced activation by increasing IL-1 release, their migration in scrapped area and their survival. GGA has an anti-apoptotic ability (induction of Hsp70-caspase3 pathway) and migratory properties (P38/RhoA activation) on NHEK, but after IR, only caspase-3 and RhoA pathways are induced. This work thus contributes to the understanding of cutaneous damages after IR and GGA mechanism of action which accelerates reepithelialization.VERSAILLES-BU Sciences et IUT (786462101) / SudocSudocFranceF