Role of Eg5 regulation and motor properties in bipolar spindle assembly in Xenopus laevis egg extract

Par cette étude, nous montrons que la phosphorylation d Eg5 par Eg2 n est pas importante pour sa fonction dans la formation du fuseau mitotique dans l extrait d oeuf de Xénope. Au contraire, la phosphorylation d Eg5 par Cdk1 est nécessaire pour son attachement aux microtubules. Cet attachement permettra par la suite l assemblage du fuseau mitotique. En plus de confirmer de précédentes études, ces résultats indiquent que le site de phosphorylation de Cdk1 n est pas seulement conservé parmi les membres des Kinésines 5, mais également que son mécanisme de régulation est conservé. Bien que des expériences plus approfondies soient nécessaires afin de caractériser les propriétés motrices d Eg5 par l intermédiaire de notre expérience de microtubule-gliding dans l extrait de Xénope, nos expériences réalisées avec des chimères d Eg5 ont souligné l importance des propriétés motrices intrinsèques à Eg5 qui sont cruciales pour la formation du fuseau mitotique. En effet, aucune de ces chimères n a pu rétablir la formation du fuseau mitotique. De plus, ces expériences ont fourni la première preuve expérimentale que la classification des Kinésines en différentes sous-familles selon la conservation de séquence de leur domaine moteur a également abouti à les classer selon leurs différentes fonctions.In this study, we show that Eg2 phosphorylation of Eg5 is not important for its function in bipolar spindle formation in Xenopus egg extract. Conversely, Eg5 needs to be phosphorylated by Cdk1 to be targeted to spindle microtubules and hence assemble a bipolar spindle in Xenopus egg extract. These findings confirm previous studies and furthermore indicate that Cdk1 phosphorylation site is not only conserved among kinesin-5 members but also that its mechanism of regulation is conserved among this subfamily. Although further experiments are required to fully characterize Eg5 motor properties in by means of our microtubule gliding assay in Xenopus egg extract, Eg5 intrinsic motor properties are definitely crucial for bipolar spindle assembly as none of the Eg5 chimeras could rescue spindle formation in Xenopus egg extract. Moreover, these experiments provide the first experimental evidence that the classification of kinesins in different subfamilies, according to their conserved motor domain sequences, has also yielded to classify them according to their diverse function.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF