Na/K-ATPase in spleen lymphocytes and hippocampus of rat; effect of morphine, stimulation by mitogen and effect of stress induced by deprivation from sleep

This work was oriented to studies of sodium and potassium dependent adenosinetriphosphatase, Na+ /K+ ATPase, which is selectively inhibited by cardioactive glycoside, ouabain. The alterations in level of this enzyme were followed in spleen lymphocytes and hippocampus prepared from rats. Detection of Na+ /K+ ATPase has been made by western blot analysis using primary antibodies oriented against α subunit of Na+ /K+ ATPase. Studies of lymphocytes were based on usage of both monoclonal and polyclonal antibodies. In studies of hippocampus monoclonal antibodies were used. The first aim of my work was to determine the alterations in the level of Na+ /K+ ATPase in spleen lymphocytes cultivated in tissue culture (i.e. under in vitro conditions) in the presence of morphine or strong mitogen, concanavalin A (ConA). The second aim of these theses was to determine the changes of Na+ /K+ ATPase α subunit in hippocampus of rats, which were under in vivo conditions exposed to stress lasting 3 days. The stress of experimental animals was induced by deprivation from sleep. The long-term incubation of spleen lymphocytes with 10 μM morphine for 48 hours did not cause a significant change of Na+ /K+ ATPase α subunit level. This result was obtain by analysis of post nuclear fraction (PNS), by use of monoclonal...Tato práce se zabývá studiem sodíkem a draslíkem aktivované adenosintrifosfatázy, Na+ /K+ ATPázy, která je selektivně inhibována kardioaktivním glykosidem ouabainem. Změny množství tohoto enzymu byly sledovány v lymfocytech sleziny a hipokampu potkanů. Metoda, která byla pro toto studiu použita, byla technika "Western blot" s pomocí protilátek orientovaných proti α podjednotce Na+ /K+ ATPázy. Při studiu lymfocytů byly použity polyklonání i monoklonální protilátky. Při studiu hipokampu byly použity pouze protilátky monoklonální. Prvním cílem diplomové práce bylo porovnat změny v hladinách Na+ /K+ ATPázy v lymfocytech pěstovaných v tkáňové kultuře (tedy v podmínkách in vitro) v přítomnosti morfia nebo silného mitogenu konkanavalinu A (ConA). Druhým cílem diplomové práce bylo stanovit změny množství tohoto enzymu v hipokampu potkanů, kteří byli vystavení stresu po dobu 3 dnů. Stres byl vyvolán spánkovou deprivací. Dlouhodobá inkubace lymfocytů v přítomnosti 10 μM morfia (48 hodin) nevyvolala významnou změnu v množství Na+ /K+ ATPázy v lymfocytech. Toto zjištění bylo prokázáno s pomocí monoklonálních protilátek ve frakci post nukleárníního supernatantu (PNS). Naproti tomu, stimulace ConA (3 μg/ml) způsobila vysoce signifikantní nárůst α podjednotky Na+ /K+ ATPázy v lymfocytech. Tento vzestup byl...Katedra fyziologieDepartment of PhysiologyFaculty of SciencePřírodovědecká fakult