Study of transferrin as a marker of congenital disorders of glycosylation

Dědičné poruchy glykosylace proteinů (CDG) představují rozsáhlou skupinu závažných metabolických onemocnění, která jsou způsobena poruchou v biosyntéze glykoproteinů. Pro "screeningové" vyšetření poruch N-glykosylace se využívá analýza sialovaných iso- forem sérového transferinu (Tf) pomocí isoelektrické fokusace (IEF). V případě nemoci dochází ke změnám v zastoupení jednotlivých isoforem Tf, rozlišujeme patologický pro- fil typu I (snížený tetra-, zvýšený di- a asialotransferin) a typu II (má navíc zvýšený tri- a monosialotransferin). Cílem diplomové práce bylo: 1) stanovit referenční rozmezí pro spektrum sialovaných forem Tf separovaných pomocí IEF a 2) provést u tří paci- entů (P1-P3) s klinickým podezřením na CDG biochemickou a molekulárně genetickou analýzu. Materiálem byly vzorky sér a genomové DNA od tří pacientů s klinickým po- dezřením na CDG a rodinných příslušníků od P1. Kontrolní soubor tvořilo 99 vzorků sér od zdravých jedinců ve věku 2-42 let. Sérum bylo analyzováno pomocí IEF s násled- nou imunofixací, SDS-PAGE a Western blotem s využitím specifické protilátky proti lidskému Tf (Dako). Profily Tf byly kvantifikovány pomocí programu AlphaEaseFC (Alpha Innotech). Data byla zpracována pomocí programu STATISTICA 9.0 (Stat- Soft). Analýza genů TF a PMM2 byla provedena pomocí cyklického...Congenital disorders of glycosylation (CDG) represent a heterogeneous group of mul- tisystemic metabolic disorders which are caused by defects in biosynthetic pathways of glycoproteins. The screening test for N-glycosylation disorders is the analyses of sialylated isoforms of serum transferrin (Tf) by means of isoelectric focusing (IEF). Two distinct pathological IEF patterns of Tf are observed. A type I pattern is cha- racterized by a decrease of tetra- and an increase of di- and asialotransferrin, whereas a type II pattern shows in addition an increase of tri- and monosialotransferrin. The aims of diploma thesis were: 1) to evaluate reference range for spectrum of sialylated forms of Tf separated by IEF and 2) to perform biochemical and molecular analyses in three patients (P1-P3) with clinical suspicion for CDG. Serum and genomic DNA from three patients with clinical suspicion for CDG and family members of P1 were analysed. Sera from 99 healthy volunteers within the age range of 2-42 years served as a control group. Tf was analysed by IEF with direct immunofixation, SDS-PAGE and Western blot using specific antibody against human Tf (Dako). Profiles of Tf were quantified by AlphaEaseFC software (Alpha Innotech). Data were analysed by software STATISTICA 9.0 (StatSoft). TF a PMM2 genes were analysed...Katedra biochemieDepartment of BiochemistryPřírodovědecká fakultaFaculty of Scienc