Régulation tissulaire de l épissage alternatif (caractérisation fonctionnelle d une séquence activatrice de la maturation d un exon 3 terminal)

L épissage alternatif des exons 3 terminaux permet de réguler qualitativement et quantitativement la production d ARN messagers. Nous étudions les déterminants de la régulation tissulaire de l épissage et de la polyadénylation en utilisant comme modèle le gène de la tropomyosine a de xénope qui contient, dans sa région 3 terminale, l exon composite interne/3 terminal 9A9 , dont l expression est tissu-spécifique. Les études in vivo précédemment réalisées au laboratoire ont permis d identifier un élément intronique qui réprime l exon 9A9 dans les cellules non musculaires. La protéine PTB se fixe sur cet élément et inhibe les réactions d épissage et de clivage/polyadénylation de l exon 9A9 . Une séquence activatrice a également été identifiée. Afin de caractériser fonctionnellement cet élément activateur nous avons bloqué son accessibilité dans les embryons de xénope à l aide de morpholinos spécifiques. Nos résultats a montrent que cet élément activateur est nécessaire à l utilisation de l exon 9A9 en tant qu exon 3 terminal dans le myotome. Nous avons également démontré que la PTB prévient son utilisation dans les cellules non musculaires à l inverse de certaines protéines SR qui favorisent la sélection de l exon 9A9 de manière dépendante de cette séquence. Les mécanismes moléculaires de l activation ont été étudiés in vitro en déterminant la composition protéique des complexes recrutés sur cette séquence. Nous avons identifié une protéine qui participerait à la répression de l exon 9A9 spécificiquement dans les tissus non musculaires.The alternative splicing of 3' terminal exons regulates qualitatively and quantitatively the production of messenger RNA. To study the determinants of tissue specific splicing and polyadenylation we use the xenopus a-tropomyosin gene as a model system. This gene contain a composite internal/3 terminal exon (exon 9A9 ) that is differentially processed depending on the embryonic tissue. Previous in vivo studies identified an intronic element that represses exon 9A9 in non muscle cells. The protein PTB binds to this element and inhibits both the splicing and polyadenylation of exon 9A9 . An enhancer element was also identified. To functionally characterize in vivo this activating sequence we used targeted morpholino nucleotides to mask it. We demonstrated that the enhancer element is required for the specific usage of exon 9A9 as a 3 terminal exon in the myotome. We also demonstrate that PTB prevents the activity of this element in non muscle cells whereas a sub-class of SR proteins promotes the selection of exon 9A9 in an enhancer element dependent way. The molecular mechanisms of activation were studied in vitro by analysing the composition of the protein complexes bound to the enhancer element. We identified one protein which could be involved in the repression of exon 9A9' specifically in non-muscle cells.RENNES1-BU Sciences Philo (352382102) / SudocSudocFranceF