Novel stationary phasis in HPLC for the analysis of biologically active compounds for clinical applications-determination of retinoic acid

All-trans retinoic acid (ATRA) and 13-cis-retinoic acid (13-cis RA) are naturally occurring retinoids. All-trans-retinoic acid plays multiple roles in reproduction, embryogenesis, cellular differention, vision and immune response and is also used therapeutically in acute promyelocytic leukemia. Tocopherols are major serum antioxidants. Both retinoids and tocopherols are studied as chemopreventive and therapeutic agents in cancer patients. In the present study, a simple and rapid HPLC method was developed for simultaneous determination of fat-soluble vitamins and retinoic acids (retinol, all-trans retinoic acid, 13-cis retinoic acid, gamma- and alpha-tocopherol) in human serum using monolithic technology. The monolithic column Chromolith Performance RP-18e (100 mm × 4.6 mm) was operated at ambient temperature. Mobile phase (MF) consisted of mixture Acetonitrile (ACN) : 1% ammonium acetate in water (AMC) at pH 7.0 starting with ACN : AMC 98:2 (column pre- treatment) at flow rate 2ml/min following 4,2 minutes ACN:AMC 95:5 at the flow rate 1.5 ml/min than 3 minutes flow rate 3,2ml/min with the same mobile phase. Detection and identification was performed using photodiode array detector. Retinol, 13-cis- and all-trans- retinoic acid were monitored at 325 nm. Alpha- and gamma-tocopherol were carried out...All-trans retinová kyselina (ATRA) a 13-cis retinová kyselina (13-cis RA) jsou přírozeně se vyskytující retinoidy. All-trans retinová kyselina má mnoho rolí v reprodukci, embryogenezi, buněčné diferenciaci, v procesu vidění a imunitní odpovědi a je také používána k terapii akutní promyelocytární leukémie. Tokoferoly jsou hlavními antioxidanty séra. Jak tokoferoly, tak retinoidy jsou studovány jako chemopreventivní a terapeutické látky pro pacienty s rakovinou. V této práci byla vyvinuta jednoduchá a rychlá HPLC metoda pro současné stanovení vitaminů rozpustných v tucích a retinových kyselin (retinol, all-trans retinová kyselina, 13-cis retinová kyselina, gama- a alfa- tokoferol) v lidském séru za použití monolitní technologie. Monolitní kolona Chromolith Performance RP-18e (100 mm × 4.6 mm) pracovala při pokojové teplotě. Mobilní fáze (MF) byla složena ze směsi acetonitril (ACN) : 1% ammonium acetate (AMC) ve vodě (pH = 7). Pro analýzu byl zvolen gradient:MF ACN : AMC 98:2 (0. fáze) při průtoku 2 ml/min, 3 minuty ACN : AMC 95:5 při průtoku 1,5 ml/min a 3 minuty průtok 3,2 ml/min se stejnou mobilní fází. Detekce a identifikace byla provedena pomocí photodiode array detektoru. Retinol, 13-cis- a all-trans retinová kyselina byly monitorovány při 325 nm. Alfa- a gama- tokoferol byly stanoveny při 295...Department of Analytical ChemistryKatedra analytické chemieFarmaceutická fakulta v Hradci KrálovéFaculty of Pharmacy in Hradec Králov