Caractérisations biochimique et cellulaire de la choline et de l éthanolamine kinase de Plasmodium falciparum

Le développement de Plasmodium falciparum, agent du paludisme, est indissociable d une production considérable de membranes par le parasite. Les biosynthèses de phosphatidylcholine (PC) et de phosphatidyléthanolamine (PE), principaux constituants de ces membranes, sont essentielles à la croissance du parasite au cours de son développement intraérythrocytaire, phase durant laquelle sont observés les symptômes cliniques de la maladie. Les travaux de cette thèse ont eu pour objectifs la caractérisation des premières enzymes des voies de synthèse de novo de PC et de PE chez P. falciparum, soit respectivement la choline kinase (PfCK) et l éthanolamine kinase (PfEK). Les paramètres cinétiques ont été déterminés sur les kinases recombinantes exprimées en système bactérien puis purifiées. La PfCK et la PfEK paraissent spécifiques de leur substrat respectif, à savoir la choline et l éthanolamine. Nous avons étudié l inhibition des kinases recombinantes par des composés analogues de substrat et par une nouvelle molécule antipaludique T3/SAR97276A, actuellement en essais cliniques de phase II. Chacune de ces enzymes est inhibée spécifiquement par l analogue de substrat. D autre part, T3, bien que conçu comme un analogue de choline, apparaît être un inhibiteur compétitif de la PfCK mais également de la PfEK. Nous avons immunisé des souris avec les protéines recombinantes purifiées. Au moyen des séra polyclonaux murins reconnaissant spécifiquement la PfCK ou la PfEK, nous avons montré que ces kinases sont localisées dans le cytoplasme de P. falciparum et sont exprimées à tous les stades du cycle érythrocytaire de ce parasite, particulièrement au stade matureMONTPELLIER-BU Pharmacie (341722105) / SudocSudocFranceF