Interaction initiale des lymphocytes T avec des surfaces contrôlées (application à l'étude du déclin immunitaire chez le sujet âgé)

L immunité cellulaire T est probablement la plus affectée par le vieillissement de l être humain avec un retentissement sur les déficiences immunitaires au niveau humoral comme au niveau cellulaire. Elle contribue à une augmentation de la susceptibilité des sujets âgés aux maladies infectieuses, à l auto-immunité, au cancer et à la baisse de la réponse vaccinale mais son intrication avec les pathologies notamment chroniques est mal connue.Notre travail s est intéressé aux temps précoces de l activation cellulaire T et à la mise au point d un modèle permettant l évaluation de la capacité d activation des lymphocytes T vis-à-vis de surfaces recouvertes d anticorps activateurs (Ac antiCD3) ou non (Ac antiHLA-ABC), observés en microscopie IRM.Ce modèle nous permet de montrer que l étalement des lymphocytes T sur les surfaces est précédé d ondulations verticales de la membrane générant des contacts transitoires durant environ 1 minute et que la cinétique d étalement est ensuite sept à huit fois plus rapide sur les surfaces supposées activatrices. D autre part, avec des dilutions successives des Ac antiCD3 sur les lamelles, l aire moyenne de la zone de contact des lymphocytes T est fortement corrélée aux réponses prolifératives mesurées avec le test de prolifération lymphocytaire standard au CFSE.Ce modèle permet également l observation en microscopie à fluorescence de différentes protéines phosphorylées des cascades de signalisation. L étude de la fluorescence des cellules T purifiées, fixées et marquées par l Ac anti-phospho-Erk en fonction des dilutions d Ac antiCD3 sur la lamelle permet d objectiver une décroissance de la moyenne de fluorescence avec les dilutions.Notre modèle a l avantage d étudier les temps précoces de l activation. Il pourrait s appliquer à l étude de l immunosénescence. Ainsi l étude du contact entre une cellule T et des surfaces activatrices pourrait s avérer être une méthode simple et utile d exploration précoce de l activation de lymphocytes T en pratique clinique.L application de notre modèle à l étude de l immunité du sujet âgé est en cours dans le cadre d une étude prospective comparative de sujets âgés malades et de sujets âgés sains recrutés selon les critères du senieur protocole .En conclusion, il s agit d un travail d approche mixte à la fois fondamentale et clinique permettant d étudier les phénomènes d immunosénescence et leur lien avec la pathologie.Our work was focused on early events in T cell activation and has proposed a model system for the Interference reflection microscopy-based monitoring of T lymphocytes activation by antibodies coated-surfaces, either with activating anti-CD3 or control anti-HLA-ABC.Our system has allowed to observe that T cell spreading on surfaces is preceded by vertical membrane undulations, generating transient contacts with the underlying surface for approximately 1 minute, and that spreading kinetics of are seven to eight times faster when activating antibodies are involved. At increasing dilutions of antiCD3 Ab on surfaces, the contact area formed between T lymphocytes and activating surfaces is linearly correlated to proliferative responses, as measured by CFSE labelling. Our system allowed also the direct observation, by fluorescent microscopy, of signaling-dependent protein phosphorylation. T cells exposed to decreasing concentrations of antiCD3 had lower phospho-Erk levels, as shown upon fixation and anti-phospho-Erk labeling. Allowing the study early events in T cell activation, our model could be applied to the study of immunosenescence. To monitor contacts between T cells and activating surfaces could be a simple and useful method for early exploration of T lymphocytes activation in clinical practice.We are currently carrying out a comparative prospective study on old sick and healthy subjects, recruited according to " senior protocol " criteria. In conclusion, our work represents a fundamental and clinical mixed approach for the study of immunosenescence-related phenomena and their link with pathologies.AIX-MARSEILLE2-Bib.electronique (130559901) / SudocSudocFranceF