Caractérisation d ARN artificiels importables dans les mitochondries humaines à des fins thérapeutiques

Les mutations dans l ADN mitochondrial (ADNmt) sont la cause de nombreuses pathologies, pour la plupart des myopathies et des maladies neurodégénératives. La majorité de ces mutations sont hétéroplasmiques, signifiant que les molécules d ADNmt muté coexistent au sein de la même cellule avec des molécules d ADNmt sauvage. Ce n est cependant en général qu à partir d un seuil d hétéroplasmie de l ordre de 70% que les symptômes de la maladie apparaissent. L objectif de cette thèse a été de tester si le taux d hétéroplasmie pouvait être diminué en adressant des oligonucléotides complémentaires à l ADNmt muté dans les mitochondries par la voie d import des ARN afin d inhiber leur réplication. Pour ce faire, nous avons utilisé un petit ARN artificiel construit sur la base des déterminants d importation de l ARNt Lys CUU importé dans les mitochondries de levure. Les résultats obtenus ont permis de montrer que cet ARN pouvait servir de vecteur pour importer dans les mitochondries humaines les oligonucléotides au potentiel anti-réplicatif et que ces derniers étaient capables d inhiber la réplication des molécules d ADNmt muté sans affecter celles des molécules d ADNmt sauvage. C est la première fois que la validité de cette stratégie dite anti-génomique a pu être testée dans un modèle de cellules humaines en culture, ce qui pourrait aboutir à une alternative prometteuse pour traiter les maladies mitochondriales causées par des mutations dans l ADNmt.Mitochondrial DNA mutations, important cause of incurable human neuromuscular diseases, are mostly heteroplasmic: mutated mtDNA is present in cells simultaneously with wild-type genomes, the pathogenic threshold being generally > 70% of mutant mtDNA. We studied if heteroplasmy level could be decreased by RNAs complementary to mutant mtDNA regions. To target specifically designed oligoribonucleotides into the organelle, mitochondrial import of RNA was exploited, the pathway delivering nucleic acids into mitochondria in vivo. Using mitochondrially targeted RNAs as mitochondrial vectors we demonstrated, in cultured transmitochondrial cybrid cells, that RNAs complementary to the mutant mtDNA region can specifically reduce the proportion of mtDNA bearing a large deletion associated with the Kearns Sayre Syndrome. These findings may be relevant to developing of a new tool for therapy of mtDNA associated diseases.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF