Mise au point d une PCR en temps réel pour le diagnostic de kératites à Acanthamoeba spp

La kératite amibienne est une pathologie rare due à des amibes libres appartenant le plus souvent au genre Acanthamoeba. Son diagnostic clinique est difficile en raison de l absence de signes spécifiques. De sa précocité dépend une prise en charge adaptée précoce et un meilleur pronostic. Ceci souligne l importance de développer de nouveaux outils de diagnostic rapides et sensibles. Objectif : Améliorer le diagnostic des KA dans notre laboratoire, en mettant au point une PCR multiplex en temps réel permettant d amplifier simultanément la cible et la béta-globine humaine, qui informe sur la qualité du prélèvement. Matériel et méthode : Des cultures axéniques d A. polyphaga ont été utilisées pour l optimisation et la détermination des paramètres analytiques (spécificité, inhibiteurs potentiels, variabilités intra et inter essais). Deux prétraitements ont été comparés ainsi que deux méthodes d extraction. Ensuite, notre PCR a été évaluée sur une série prospective de grattages cornéens. Résultats : La sensibilité de notre technique, en associant un prétraitement par choc thermique et une extraction manuelle, est d une seule forme isolée par échantillon. Aucune amplification non spécifique n a été observée avec les 12 microorganismes bactériens ou fongiques extraits. Aucun des 14 collyres testés n est un inhibiteur total de l une ou l autre des PCR. Sur les 38 grattages, 7 n ont pas pu être interprétés du fait d une quantité insuffisante de prélèvements et 4 ont été considérés comme de vrais positifs. Conclusion : Notre PCR multiplex est un nouvel outil fiable, rapide et sensible qui permet, en une seule réaction, d amplifier la cible et d informer sur la qualité du prélèvement.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF