Conception de sondes et nano-sondes à base de lanthanides émettant dans le proche infrarouge pour la microscopie biphotonique

L objectif de cette thèse est l élaboration de sondes à base de lanthanide pour la microscopie optique biphotonique. Cette technique d imagerie complémentaire à l IRM et au scanner permet une analyse rapide et facile de tissus épais. Afin de permettre l observation en profondeur, l absorption et l émission de la sonde doit se situer dans la zone de transparence biologique [700 1200 nm]. L absorption à deux photons (ADP) est un phénomène d optique linéaire de troisième ordre par lequel l état excité est atteint par absorption simultanée de deux photons. De fait, l excitation à énergie moitié se situe dans la zone de transparence biologique. Les sondes envisagées combineraient les propriétés optiques uniques des lanthanides, telles que des bandes d émission très étroites allant du visible à l infrarouge et des durées de vie de luminescence longues, et les avantages de l ADP, permettant une excitation dans l IR et une résolution tridimensionnelle. Dans ce contexte, cette thèse décrit l élaboration de complexes d europium et d ytterbium à ligands macrocycliques stables en milieu aqueux et dont la luminescence peut être sensibilisée à deux photons. Ces complexes ont permis l imagerie de la vascularisation de cerveaux de souris par microscopie biphotonique dans le proche infrarouge. La seconde approche consiste à encapsuler un complexe luminescent dans des nanoparticules desilice formées par la technique sol-gel (collaboration A. Ibanez, institut Néel, Grenoble) afin de protéger le complexe du milieu biologique. Enfin la dernière approche consiste à greffer des complexes de lanthanides à la surface d une particule de silice par chimie organométallique de surface. Ces travaux ont conduit à la formation de nano-objet très brillants dans le rouge et le proche infrarouge, détectables à l échelle de l objet unique par microscopie à deux photons.Two Photon Scanning Laser Microscopy (TPSLM) has evolved as an emerging bio-imaging technique widely used in academic research and in medical diagnosis. This technique requires the design of bioprobes specially optimized for such purpose. A particular attention is actually devoted bio-probes featuring both two-photon absorption (TPA) and emission in the near infra-red (NIR) spectral range [700 1200 nm], also called biological window that is particularly promising for thick tissues imaging. In this context, europium complexes emitting in the red (615 nm) has been recently sensitized by two photon antenna effect and used for TPSLM in cells combining the advantages of lanthanide emission (sharp line and long lived) and those of TPA. Based on this preliminary results, this thesis describe the design of europium and ytterbium complexes which have an improved stability in water and good emission properties sensitized by TPA. Theses complexes allow the imaging of mice s brain vascularisation in the NIR. An another approach to stabilize lanthanide complexes was also used by encapsulating theses fluorophores in silica nanoparticle (collaboration with A. Ibanez, Institut Néel, Grenoble). Then the last approach consists on the grafting of the chromophores on silica sphere using surface organometallic chemistry methods. The nanoparticles obtained by both way are really luminescent in the red or infrared and can be imaged as single nanoparticle by TPSLM.LYON-ENS Sciences (693872304) / SudocSudocFranceF