Biosynthèse des isoprénoïdes bactériens (Inhibiteurs potentiels de la désoxyxylulose phosphate synthase et caractérisation des étapes de réduction dans la formation des hopanïdes)

La désoxyxylulose phosphate synthase (DXS), première enzyme de la voie du MEP présente chez de nombreux microorganismes mais absente chez les animaux, représente une cible potentielle pour le développement de nouveaux médicaments contre les maladies causées par des bactéries pathogènes ou par des parasites. Dans cet objectif, l élaboration d inhibiteurs potentiels de cette enzyme a été envisagée. Plusieurs accepteurs de Michael, un analogue phosphoré du pyruvate et des dérivés di- et trihalogénés ont été synthétisés. Certains de ces composés montrent une faible activité inhibitrice de la DXS. De plus, afin de mieux comprendre la biosynthèse des isoprénoïdes, nous nous sommes plus particulièrement intéressés à la protonation in vivo d un cation allylique intermédiaire dans la réaction catalysée par la dernière enzyme de la voie du MEP (LytB). Le donneur de proton serait le cofacteur (FADH2) de réduction utilisé à la fois comme donneur d électrons et de protons. Pour mettre en évidence la signature de ces étapes de réduction, le métabolisme de Zymomonas mobilis est utilisé, car il permet la formation d un pool de NADPH deutérié en incubant du [1-2H]glucose. Le deutérium est donc incorporé dans tous les cofacteurs de réduction et serait transféré sur les unités isopréniques dérivées de l IPP (C-2) ou du DMAPP (C-4). Les positions du deutérium ont été déterminées dans les triterpénoïdes de série hopane par RMN 13C en analysant les déplacements vers les champs forts des signaux du 13C. L introduction de deutérium en position C-2 a été confirmée, la présence de deutérium en position C-4 et d une activité IPP isomérase chez Zymomonas mobilis a pu être mise en évidence.The enzymesoftheMEP pathwaypresentinmanymicroorganismsbutabsentin animals,are potential targetsfordevelopingnew drugsagainst diseases causedby pathogenic bacteria or parasites.Inthisobjective, thedevelopmentof potential inhibitorsof thispathway hasbeen considered.Thedeoxyxylulosephosphatesynthase (DXS),the firstenzyme of theMEP pathway, was chosenas a targetandanaloguesof its substrate,pyruvate,weresynthesized andtheirbiochemical characteristicshave beenestablished.signals of 13C.Inaddition, toimprove the understanding of thebiosynthesisofisoprenoids, experimentswere performedonZymomonasmobilistodeterminetheoriginof thehydrogen atomsof isopentenyldiphosphate(IPP)anddimethylallyldiphosphate(DMAPP) from the MEP.Weare particularly interested instudyinginvivotheprotonationofallylic cationic intermediate inthereactioncatalyzedby thelastenzymeoftheMEP pathway(LytB). The proton donoristhereducing cofactor(FADH2)usedbothas an electronsdonorand protons donor.Tohighlightthesigningof thesereduction steps, themetabolism of Zymomonasmobilisis usedbecauseitallowstheformationofapoolofdeuterated NADPH by incubating[1-2H]glucose. Deuteriumisincorporated inallreducing cofactors NADP2H and thusFAD2H2andwould betransferredtotheisoprene units derivedfromIPP orDMAPP. The positions of deuterium were determined in hopanoids by 13C NMR by analyzing the shifted signals of 13C.STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF