Efecto del uso de un líquido ionico en la preparación de muestras biológicas para su observación en el microscopio electrónico de barrido ( MEB)

El microscopio electrónico de barrido (MEB) permite estudiar estructuras morfológicas y superficiales de los materiales, a través de la obtención de microfotografías con alta magnificación y una resolución menor a 1 nm. En la presente investigación se evaluó el efecto del uso de un líquido iónico (LI) y cuatro tratamientos tradicionales, como tratamientos de muestras biológicas con alto contenido de humedad para su observación en el MEB en condiciones de alto vacío. Para este trabajo se obtuvieron perlas de alginato calcio-mucílago de Salvia hispánica L. (chía), como muestra orgánica, con alta humedad y baja conductividad debido a su naturaleza polimérica, por lo que se sugiere darle un tratamiento antes de introducirlas en una cámara de alto vacío del MEB al igual que otras muestras biológicas con estas mismas características. Los cuatro tratamientos tradicionales han utilizado el secado de punto crítico con y sin la incorporación de fijadores químicos por ejemplo co-reticulantes, aminoácidos y colorantes que preservan la estructura del espécimen, aumentan el brillo y contraste en las microfotografías, así también se usa el recubrimiento con metales con el objetivo de incrementar la conductividad de la muestra y evitar que se cargue. Aparte de estos cuatro tratamientos tradicionales también se evaluó el efecto del uso del 1 etil 3 metil imidazolio, como tratamientos químico reciente, el cual es un líquido iónico que permanece líquido a temperatura ambiente o menos de 100 °C debido a la carga electrostática deslocalizada de sus componentes, también tiene una presión de vapor insignificante, una conductividad que aumenta con la temperatura, posee una naturaleza hidrofílica y baja densidad; estas características lo hacen óptimo para utilizarlo en una cámara de alto vació de un MEB. Estos métodos se proponen para mantener las características morfométricas iniciales (diámetro de Féret máximo, relación de aspecto y circularidad) y de textura de las perlas; durante los tratamientos hasta la observación con el MEB a través de un análisis de imagen y estadístico utilizando los programas ImageJ y Sigma Plot 14.0 respectivamente. Los resultados mostraron que las perlas, durante la preparación con los tratamientos tradicionales y el LI disminuyeron el diámetro de Feret inicial de las perlas en un 22.93% y 8.69% en promedio respectivamente; sin embargo, las demás características vi morfométricas no se vieron afectadas. Luego los resultados de las perlas en la cámara de alto vacío con los distintos tratamientos mostraron las microfotografías de su morfología, resaltando el uso del LI al proporcionarle la suficiente conductividad a las perlas para observar su forma completa en la pantalla, y debido a su naturaleza hidrofílica y presión de vapor insignificante, la muestra se mantuvo húmeda dentro de la cámara de alto vació durante el análisis, además por su baja densidad se pudo obtener imágenes con una resolución y contraste que proporcionan información de los distintos componentes de la superficie de las perlas al igual que los cuatro tratamientos tradicionales. En cuanto a sus características morfométricas se observó que el LI sólo afectó el diámetro de Féret inicial de las perlas disminuyéndolo en un 30.54%; así mismo, la viscosidad del 1 etil 3 metil imidazolio no permitió una distribución homogénea del LI por toda la superficie de la muestra, de tal forma que se observó la acumulación de este en ciertas zonas, proporcionando una información de textura superficial lisa a comparación de los tratamientos tradicionales que resultaron dar una información de textura superficial rugosa. En conclusión el efecto del uso del 1 etil 3 metil imidazolio y los tratamientos tradicionales, como métodos propuestos para mantener las características morfométricas iniciales de las perlas de alginato de calcio-mucílago de Salvia hispánica L. (chía) y su observación en el MEB en condiciones de alto vacío, se concluye que todos los tratamientos disminuyen el tamaño de las perlas pero mantienen la forma de estas, resaltando el tratamientos con LI, el cual proporcionó una forma simple de preparar muestras orgánicas y biológicas de alta humedad, por lo que no se necesita un secado y recubrimiento de las muestras orgánicas como en el caso de los otros tratamientos, además de conservar su estructura lo que permitió obtener microfotografías de buena calidad, proporcionando información de su topografía y morfología a través de un análisis de imagen.Tesi