Preparation Of Amperometric Biosensor With Bienzyme For Acetylcholine Determination

Bu çalışmada, asetilkolin tayini için çift enzimli yeni bir amperometrik biyosensör geliştirildi. Bu amaçla, asetilkolinesteraz ve kolin oksidaz enzimleri, polianilin- polivinilsülfonat film üzerine çapraz bağlama yöntemiyle immobilize edildi. Hazırlanan elektrot için optimum çalışma şartları belirlendi. Asetilkolin tayini, hazırlanan enzim elektrodun yüzeyinde gerçekleşen enzimatik tepkime sonucunda oluşan hidrojen peroksidin 0,40 V sabit potansiyelde yükseltgenmesine dayanılarak yapıldı. Enzim elektrodun asetilkolin tayini için çalışma aralığı belirlendi. Biyosensör cevabına pH'nın ve sıcaklığın etkisi araştırıldı. Biyosensörün tekrar kullanılabilirliği ve raf ömrü tayin edildi. Biyolojik ortamlarda olabilecek girişimlerin biyosensör cevabı üzerine etkileri incelendi. Hazırlanan biyosensör ile gerçek numunedeki asetilkolin miktarı değerlendirildi.In this study, a new bienzymatic amperometric biosensor for acetylcholine determination was developed. For this reason, acetylcholinesterase and choline oxidase enzyms has been immobilized on polyaniline-polyvinylsulphonate film via cross-linking. Optimum conditions of enzyme electrode were determined. Acetylcholine detection is based on the oxidation of hydrogen peroxide at 0,40 V produced by the enzymatic reaction on the enzyme electrode surface. The linear working range of enzyme electrode was determined. The effects of pH and temperature on the response of the acetylcholine biosensor were investigated. Reuseability and storage stability of the biosensor were determined. Interference effects were investigated on the amperometric response of the biosensor. With this biosensor the value of actual sample was evaluated