AVALIAÇÃO DA FIBRONECTINA TECIDUAL EM PULMÃO DE EQUINOS COM SÍNDROME DA ASMA SEVERA EQUINA

Síndrome de asma severa equina é uma afecção respiratória de vias aéreas inferiores associada a dispneia grave em repouso e intolerância ao exercício. Apresenta quadro clínico e fisiopatológico muito semelhante à asma humana e, dentro das alterações observadas, o remodelamento da matriz extracelular (MEC) das vias aéreas é um ponto crítico. A fibronectina é uma glicoproteína adesiva que participa do processo de remodelamento e está presente transitoriamente durante o desenvolvimento ou em processos regenerativos da MEC. Este trabalho buscou analisar a distribuição e quantificá-la através de imunohistoquímica. As amostras avaliadas eram lâminas com cortes de 5 µm de espessura de tecido pulmonar oriundo de sete equinos incluídos no grupo ASMA/ORVA (idade superior a 7 anos, expostos a antígenos de poeira de feno, em fase clínica de exacerbação, anamnese e avaliação clínica com quadro de esforço expiratório e dispneia em repouso, avaliação do lavado broncoalveolar com neutrofilia maior que 25%) e de cinco animais controle (livres de histórico e de aspectos clínicos relacionada a doenças respiratórias, também expostos ao mesmo ambiente). O método imunohistoquímico consistiu na sequência padrão de desparafinização, reativação enzimática com pepsina (S3002 Dako) por oito minutos a 37ºC, seguido de bloqueio da Peroxidase e Fosfatase Alcalina tecidual (Dako S2003) por 30 minutos. Para identificação da fibronectina foi utilizado o anticorpo primário de coelho anti-humano (CL54951AP1, CedarlaneÔ) de compatibilidade superior a 85%, na diluição de 1:500, overnight em câmara úmida. Para a revelação da reação foi utilizado diaminobenzidina (DAB) (K03468 Dako). A captura de imagens foi executada com o auxílio de uma câmara acoplada a um microscópio Leica DM500. Para a análise de imagem utilizou-se o programa ImageJ®. Dos cortes pulmonares de equino de ambos os grupos, foram fotografados 20 campos aleatórios de cada lâmina/animal com objetiva de 10x, sendo que estes apresentavam áreas alveolares, bronquiais e peribronquiais. As relações de áreas obtidas: total, branca, tecidual e marrom no tecido pulmonar foram avaliadas por relação de proporção, designada de cálculo de fração volume (FV). Os dados foram analisados pelo programa estatístico Prism 7®, sendo testada a normalidade dos dados pelo teste D’Agostino & Pearson (α=0,05) e na sequência a comparação de médias pelo teste Welch (P