New protocol for lentiviral vector mass production

Multiplasmid transient transfection is the most widely used technique for the generation of lentiviral vectors. However, traditional transient transfection protocols using 293 T adherent cells and calcium phosphate/DNA co-precipitation followed by ultracentrifugation are tedious, time-consuming, and difficult to scale up. This chapter describes a streamlined protocol for the fast mass production of lentiviral vectors and their purification by affinity chromatography. Lentiviral particles are generated by transient transfection of suspension growing HEK 293 cells in serum-free medium using polyethylenimine (PEI) as transfection reagent. Lentiviral vector production is carried out in Erlenmeyer flasks agitated on orbital shakers requiring minimum supplementary laboratory equipment. Alternatively, the method can be easily scaled up to generate larger volumes of vector stocks in bioreactors. Heparin affinity chromatography allows for selective concentration and purification of lentiviral particles in a singlestep directly from vector supernatants. The method is suitable for the production and purification of different vector pseudotypesLa transfection transitoire multiplasmide est la technique la plus largement utilis\ue9e pour produire des vecteurs lentiviraux. Toutefois, les protocoles classiques de transfection transitoire, qui font appel aux cellules adh\uc3\ua9rentes 293 T et \uc0 la pr\ue9cipitation de l'DN par le phosphate de calcium, suivie d'une ultracentrifugation, sont fastidieux, longs et difficiles \uc0 reproduire \uc0 grande \ue9chelle. Ce chapitre d'crit un protocole simplifi\ue9 de production massive et rapide de vecteurs lentiviraux et de leur purification par chromatographie d'affinit\ue9. Les particules lentivirales sont produites par transfection transitoire de cellules HEK-293 cultiv\ue9es en suspension dans un milieu sans s\ue9rum en utilisant la poly\ue9thyl\ue9nimine (PEI) comme r\ue9actif de transfection. La production des vecteurs lentiviraux s\ue9effectue dans des erlenmeyers fix\ue9s sur des agitateurs orbitaux et n\uc3\ua9cessite peu d'appareils de laboratoire suppl\ue9mentaires. Il est \ue9galement possible de reproduire cette m\ue9thode \uc0 plus grande \ue9chelle pour g\ue9n\ue9rer des volumes plus importants de stocks de vecteurs dans des bior\ue9acteurs. La chromatographie d'affinit\ue9 sur h\ue9parine permet, en une seule \ue9tape, de concentrer et de purifier de mani\ue8re s\ue9lective les particules lentivirales directement \uc0 partir des surnageants de vecteurs. Cette m\ue9thode se pr\ue9te \uc0 la production et \uc0 la purification de diff\ue9rents pseudotypes de vecteurs.Peer reviewed: YesNRC publication: Ye