Purificação e caracterização de peptídeos antimicrobianos inéditos isolados da secreção cutânea da rã Leptodactylus labyrinthicus

Trabalho de Conclusão de Curso (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Farmácia, 2019.Atualmente, as doenças infecciosas estão entre as principais causas de mortalidade no mundo devido à resistência dos microrganismos aos antibióticos disponíveis no mercado. Os anfíbios dispõem de características especiais em relação a outros grupos de animais, por possuírem em sua pele glândulas responsáveis tanto pela respiração, regulação de temperatura e osmorregulação quanto pela liberação de compostos bioativos, com propriedades antimicrobianas, antifúngicas e antiparasitárias que servem para a proteção da integridade do animal. A secreção cutânea do anuro Leptodactylus labyrinthicus já foi analisada, resultando na descoberta de peptídeos antimicrobianos (PAMs) como a pentadactilina, a falaxina e a leptoglicina. Neste trabalho, a partir de ensaios de varredura das frações advindas de cromatografias por RP-HPLC, foram identificadas sete frações ativas para as bactérias patogênicas Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Posteriormente, análises por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF possibilitaram a identificação dos PAMs previamente descritos para essa espécie, além de outros componentes que representam possíveis fragmentos dos PAMs já caracterizados, bem como peptídeos inéditos. Foram identificadas duas frações ativas: LLF5 e LLF-9. A partir da recromatografia da fração LLF-9 foi isolado e caracterizado um peptídeo inédito presente nessa secreção. Tal peptídeo, com massa molecular de 2.601,42 Da, foi submetido ao sequenciamente químico por degradação de Edman, resultando em uma sequência não-ambígua composta por 25 resíduos de aminoácidos e tendo uma provável amidação na porção C-terminal: GLWDDLKAAAKKVVSSLASAAMEKL25-NH2. Esse novo PAM exibiu 96% de identidade com o peptídeo promotor de comportamento agressivo em machos (aggression-stimulating peptide, LASP) isolado da secreção cutânea da rã L. fallax. Estudos comportamentais devem ser conduzidos com o intuito de se determinar se o peptídeo de 2,6 kDa de L. labyrinthiucs também é capaz de promover comportamento agressivo nos machos dessa espécie