Caracterização de resistências antimicrobianas provenientes de reservatórios ambientais : estudo de mecanismos de resistência aos beta-lactâmicos em Gram-negativos

Dissertação de mestrado em Genética MolecularO aparecimento e disseminação de Resistências Antimicrobianas (AMR, antimicrobial resistance) em bactérias patogénicas/zoonóticas tem sido classificado como uma das maiores ameaças para a saúde pública. A presença de bactérias com AMR tem sido cada vez mais detectada em instalações de produção animal , em solos e águas residuais, nas águas de esgotos urbanos e áreas agrícolas contaminadas com pesticidas. Durante as últimas décadas, os esforços para o combate aos microrganismos multi-resistentes têm-se focado, principalmente, nas bactérias Gram-positivas, no entanto, o problema continua a crescer, pois não têm sido desenvolvidos, paralelamente, antimicrobianos para combater bactérias Gram-negativas. Neste trabalho pretendeu-se fazer o isolamento de bactérias Gram-negativas provenientes de amostras ambientais, com recolhas em locais urbanos e outras em zonas mais rurais, de produção de animais. Assim fez-se uma selecção dos microrganismos mais resistentes, determinando-se a sua CMI a diferentes betalactâmicos, incluindo cefalosporinas de 2ª e 3ª geração, tendo sido feita por ultimo a avaliação da presença ou ausência de genes associados à resistência a esta classe de antibióticos (blaTEM, blaCTX-M, blaOXA, blaSHV e ampC). Após a identificação dos isolados pôde-se observar que a maioria pertencia ao género Pseudomonas spp., principalmente à espécie P. putida. A partir daqui foram escolhidos os isolados mais interessantes para o estudo, n=71, determinando-se as CMIs, revelando que estes isolados são bastante resistentes à ampicilina, amoxicilina, cefoxitina, cefotaxima e Aztreonam. Pelo contrário, revelaram uma grande sensibilidade à ceftazidima. Daqui partiu-se para a identificação da presença dos genes acima citados e verificou-se uma maior prevalência do gene ampC e blaCTX-M. Pode-se então, concluir que a P. putida é um microrganismo com um potencial impacto relevante no contexto de AMR, que demonstra veicular resistências antimicrobianas de modo quase intrínseco. Esta é uma preocupação que devemos ter em conta, visto que esta bactéria está facilmente em contacto com o Homem, sendo patogénico oportunista, assim como com outras bactérias patogénicas mais comuns em infecções.The emergence and spread of antimicrobial resistance (AMR) in zoonotic/pathogenic bacteria has been rated as one of the greatest threats to public health. The presence of bacteria with AMR has been increasingly detected in animal production facilities, soils and wastewater, sewage in urban and agricultural areas contaminated with pesticides. During the last decades, efforts to combat drug-resistant microorganisms have been focused mainly on gram-positive bacteria, however, a major issue remains since no new drugs have not been developed in parallel to combat Gram-negative resistant pathogens. In this work, we intended to isolate Gram-negative bacteria from environmental samples collected in a urban areas and in a rural area with livestock. A selection was made of the most resistant bacteria to selected betalactamic agents, including cephalosporins of 2nd and 3rd generation, and determining their MIC; finally the presence or absence of genes associated with resistance to this class of antibiotics (blaTEM, blaCTX-M blaOXA, blaSHV and amp-C) was evaluated. After identification of the isolates, we observed that the majority belonged to the genus Pseudomonas spp. especially the species P. putida. From here were selected the more relevant isolates for this study, n = 71. MIC determination revealed that these strains are in general highly resistant to ampicillin, amoxicillin, cefoxitin and cefotaxime. On the other hand, they revealed an extense sensitivity to ceftazidime. A higher prevalence of the gene amp-C and blaCTX-M was detected than for the other genes analysed. We can conclude that P. putida is an organism with a high potencial risk for dissemination of antimicrobial resistances and demonstrates acquired resistance easily. This is a concern that must be taken into account, since this bacteria is easily in contact with humans, animals and with more comun pathogenic microrganisms