Puesta a punto de las técnicas de sensibilización cutánea: DPRA, Kerationosens y h-CLAT

[ES] Un compuesto sensibilizante cutáneo es aquel capaz de provocar dermatitis de contacto alérgica (DCA), una reacción cutánea local que se caracteriza por el enrojecimiento, la hinchazón y el picor de la zona expuesta. Los ingredientes cosméticos son un ejemplo de compuestos que podrían desencadenar este tipo de respuesta. Se sabe que en el proceso de sensibilización cutánea existen cuatro eventos clave, tres de los cuales pueden estudiarse hoy en día utilizando técnicas in vitro e in chemico, sin necesidad de utilizar modelos animales. En este trabajo se pusieron a punto las tres técnicas descritas hasta el momento por la Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico (OECD) para determinar el potencial sensibilizante de un compuesto: El Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA), un ensayo in chemico basado en HPLC que estudia la capacidad de una sustancia para formar un complejo hapteno-proteína, el primer evento clave del proceso de sensibilización; la técnica in vitro Keratinosens, que se centra en la inducción de genes citoprotectores en los keratinocitos tras la exposición a un compuesto de estudio (segundo evento clave) y, por último, el human Cell Line Activation Test (h-CLAT), que evalúa mediante citometría de flujo la expresión de los marcadores de superficie CD86 y CD54 en las células dendríticas utilizando una línea celular monocítica (THP-1), siendo este el tercer evento clave del proceso de sensibilización cutánea.[EN] Skin sensitizers are substances capable of causing allergic contact dermatitis (ACD), a local skin reaction characterized by redness, swelling and itching. Cosmetic ingredients are a clear example of compounds that could trigger this response. It is known that skin sensitization process includes four key events, three of which can be currently evaluated using in vitro and in chemico approaches, without needing to use animal testing strategies. In this study the fine tuning of three techniques described by the Organisation for Economic Cooperation and Development (OECD) was conducted in order to evaluate the sensitization potential of chemical substances: the Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA), an in chemico test based on HPLC that assesses the ability of a substance to form a hapten-protein complex, which is the first key event in the skin sensitization process; the Keratinosens in vitro test method assesses the induction of cytoprotective genes in keratinocytes after exposure to a test compound (second key event) and, finally, the third key event of the skin sensitization process that is assessed by the human Cell Line Activation Test (h-CLAT) that makes use of flow cytometry in order to evaluate CD86 and CD54 expression in dendritic cells, using a human monocytic cell line (THP-1).Fombuena Sanmiguel, C. (2019). Puesta a punto de las técnicas de sensibilización cutánea: DPRA, Kerationosens y h-CLAT. http://hdl.handle.net/10251/124559TFG