Necrotizing enterocolitis: the L-argenin's protector effect into histopathological and bioquimical changes on the newborn rat's intestinals wall

Objetivo: Investigar o efeito da L-Arginina em roedores submetidos às condições de hipóxia e reoxigenação num modelo experimental de enterocolite necrosante através da avaliação bioquímica dos valores teciduais do óxido nítrico e do malondialdeido, como também pelas alterações histopatológicas e imuno-histoquimicas dos intestinos. Métodos: Utilizou-se 80 ratos recém-nascidos da linhagem Wistar EPM-1 ambos os sexos, pesando 4,4 a 6,6 g. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 3 classes: grupo 1 (H/R) = (n 32) hipóxia e reoxigenação, grupo 2 (ARG) = (n 32) pré-tratamento com L-arginina mais H/R e grupo 3 (CTL) = (n 16) controle. Os animais dos grupos H/R e ARG foram submetidos em câmara de gás numa atmosfera com CO2 a 100% por 5 minutos em temperatura de 22° C e a seguir re oxigenados com O2 a 100% por outros 5 minutos, 2x/dia nos primeiros três dias de vida. Morreram 7 animais do grupo 1 (H/R), 5 animais do grupo 2 (ARG) e nenhum animal morreu do grupo 3 (CTL). No 3º, 6º e 13º dias de vida oito animais dos grupos 1 e 2 e quatro do grupo 3 foram anestesiados, laparotomizados e os intestinos ressecados. Amostras de íleo e de cólon foram conservadas em formalina para exame histopatológico e imunohistoquimico, outras amostras foram resfriadas em – 80°C e preparadas 14 para dosagens do óxido nítrico e malondialdeido tecidual. As lesões intestinais foram classificadas segundo Chiu et al. Resultados: Os grupos H/R e ARG apresentaram lesões características da enterocolite necrosante, porém com melhor preservação das estruturas no grupo ARG. A quantidade de gânglios do plexo mioentérico foi mais numeroso no grupo que recebeu H/R e L-arginina (14.93 ± 0.51) comparado ao que só recebeu H/R (11.10 ± 0.43) - estatisticamente significante. O numero dos neurônios contados dentro dos gânglios apresentou diferença estatisticamente significativa entre os grupos de estudo (p = 0.0044). No íleo, a concentrações do NO revelou-se significativamente mais elevado: G-H/R = 7,3 ± 2,0 µMol e G-Arg =16,5 ± 4,1 µMol (p=0,0019); entretanto, no cólon este efeito não foi significativo: G-H/R = 10,7 ± 4,6 µMol e G-Arg = 15,6 ± 8,7 µMol (p=0,2480). Observouse significativa diferença entre os grupos 1 e 3 (0,0030), e grupos 1 e 2 (0,0213) quanto a presença de peroxidação lipídica, mas não se constatou entre os grupos 2 e 3 (0,2771). Conclusão: Oferta de L-arginina contribui para aumentar os níveis de NO tecidual, reduzir a concentração do MDA e diminuir as lesões na parede s intestinal de ratos submetidos a H/R.Aim: This study highlights the relevance of the mechanism injury on developmental of the Necrotizing Enterocolitis a pediatric surgical condition and the investigative interest in L-Arginine - substance with bowel protective effects at the events of hipóxia/reoxygenation. There is histopathological and immuno-histochemical evaluation of the intestinal wall, tecidual analysis of the NO levels and comparisons among the concentration of the MDA. Methods: 80 newborn rats Wistar EPM-1 were raffled and labeled as group 1: hypoxia/reoxygenation (n 32); group 2: L-Arginine pretreatment and H/R (n 32); group 3: control (n 16). The rats of groups 1 and 2 were exposed twice a day during 3 consecutive days and gas chamber with CO2 (100%) for 5 minutes followed of reoxygenation with O2 (100%) for others 5 minutes. Thirty minutes before H/R there was injected 0,2 ml of L-Arginine solution (5%) in peritoneum of group 2. Twelve rats of the groups 1 and 2 died after the experiments. Eight animals of groups 1 and 2, and four of 16 group 3 were anaesthetized and sacrificed on 3º, 6º and 13º days. Total intestinal were cut off to evaluation histopatology (HE, S-100 and NSE), frosted (-80°C) to NO and MDA analysis. Intestinal injuries were classified to Chiu’s criteria. Results: Macroscopically were not observed signs of H/R-induced intestinal injury. NEC characteristic damage showed groups 1 and 2, more grades 4 injuries in group 1 and grades 2 injuries in group 2 (p< 0,05). There is signification difference on ganglions and neurons numbers of the mioenteric plexus. The NO levels in the ileum were much higher with group 2 (16.5 ± 4.9; p = 0.0019) and group 1 (7.3 ± 2.0), but were not in colon (p = 0.2480). The MDA compare groups 1-3 (0,0030) and 1-2 (0,0213) were significance, but were not groups 2-3 (0,2771). Conclusions: Arginine attenuate the newborn rats intestinal injury unchained to H/R.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe