Identification of a new site of angiotensin-I converting enzyme (ACE) production in IMCD cells and study of interation between the bradykinin receptors and ACE using ACE inhibitors

Enzima conversora de angiotensina I (ECA) ou kininase II é uma dipeptidil- carboxipepitidase (EC 3.4.15.1) que tem um importante papel na regulação de pressão sangüínea, cliva o dipeptídeo C-terminal da angiotensina I(AI)i produzindo o potente peptídeo vasopressor angiotensina II (AII) e inativa bradicinina (BK), um potente vasodilatador. Baseados no estudo de Casarini e cols. (1997) no qual um novo sítio produção de ECA foi localizado no ducto coletor, o objetivo deste trabalho foi purificar e caracterizar na cultura de células mIMCD-3 a presença e/ou síntese da ECA, enfatizando desta forma um papel fisiológico importante para esta enzima nestas células, uma vez que todo sistema calicreína-cininas encontra-se presente nesta região. Outro objetivo foi estudar a interação da ECA com os receptores B2 da BK utilizando inibidores da ECA. Inicialmente, isolamos a atividade da ECA presente nas células mIMCD no meio de cultura, por gel filtração em coluna empacotada com resina AcA-34 previamente calibrada. Cada isoforma foi recromatografada em coluna afinidade Lisinopril-sepharose. As enzimas isoladas do meio foram denomina M1 e M2, e as ECAs extraídas das células, C1 e C2. As massas moleculares determinadas por eletroforese em gel de poliacrilamida foram: M1, 60 kDa e M2 117 kDa (isoformas secretadas) e C1, 63 kDa e C2, 130 kDa (isoformas intracelulares). A expressão protéica foi verificada por Western Blotting utilizando anticorpo monoclonal 9B9, nas isoformas purificadas e nas frações do citoplasma da membrana e do núcleo…(au).BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe