Genetic vaccination during experimental infection with Trypanosoma cruzi using genes expressed in different developmental stages of the parasite

A imunizacao de I camundongos, com plasmidios contendo genes de Trypanosoma cruzi induziu anticorpos especificos, celulas T CD4+ Thl, CD8+ Tcl e imunidade protetora contra infeccao. Ate o momento em que iniciamos este trabalho' os plasmidios utilizados para vacinacao com DNA continham genes codificando antigenos expressos por tripomastigotas, as formas nao replicativas do parasita. No presente estudo,' exploramosi a possibilidade de utilizar genes expressos, por amastigotas, as formas do parasita que se replicam dentro das celulas do hospedeiro, para vacinacao experimental com DNA. Com este fim, selecionamos para nosso estudo um gene relacionado a proteina-2 de superficie de amastigotas (ASP-2), um antigeno reconhecido por anticorpos e celulas T de camundongos e individuos infectados utilizando oligonucleotideos especificos para o gene asp-2, quatro grupos distintos de genes foram amplificados a partir do cDNA de formas amastigotas da cepa Y de T. cruzi. Ao nivel de nucleotideos, eles compartilharam 82,3 a 89,9 por cento de identidade com o gene asp-2 descrito previamente. Um gene denominado clone 9 apresentou o maior grau de identidade com o gene asp-2 e foi selecionado para estudos imunologicos. Anti-soro policlonal gerado contra a porcao C-terminal da proteina recombinante expressa pelo gene clone 9 reagiu comi um, antigeno i de aproximadamente 83 kDa expresso nas formas amastigotas de T~ cruzi. A imunizacao de camundongos BALB/c com plasmidios de expressao em celulas eucarioticas contendo o gene clone 9 induziu anticorpos especificos e a secrecao de IFN- dependente de celulas T CD4+. Quando desafiados com formas tripomastigotas, os camundongos imunizados com os plasmidios contendo o gene clone 9 exibiram parasitemias reduzidas e sobreviveram a infeccao letal, Subsequentemente, testamos a hipotese de que talvez pudessemos incrementar a, imunidade protetora contra a infeccao experimental pela inducao simultanea de uma resposta imune contra antigenos expressos nas formas amastigotas e tripomastigotas do T cruzi, Com este intuito, camundongos altamente suscetiveis A/Sn foram imunizados com plasmidios contendo o gene clone 9 ou o gene da trans-sialidasea(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe