Interation between the protooncogene mas product and the angiotensin II AT1 receptor

1. Em vista de evidencias de que o mas proto-oncogene pode modular as respostas do receptor AT1 a angiotensina II (AngII), o objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de tecnicas de biologia molecular e ensaios farmacologicos, a possivel interacao entre os receptores AT1 e o mas. Para isso foram construidos mutantes do AT1 com alteracoes de residuos com possivel participacao num hipotetico heterodimero: (a) os residuos Cys18 e Lys20 do dominio N-terminal, sugeridos como estabilizadores de um sitio regulador na regiao extracelular do receptor AT1 (Santos e cols, 2004) sao portanto possiveis mediadores do processo de dimerizacao. (b) a Lys102, cuja substituicao por alanina promoveu a formacao de um dimero funcional com o mutante K199A (Monnot e cols. 1996). 2. O receptor AT1 selvagem e os seus mutantes K102A, C18F/K20A, bem como o mas proto-oncogene, foram expressos e co-expressos de forma correta como planejado para o desenvolvimento deste trabalho. 3. Mutacoes simultaneas (C18F/K20A), mas nao isoladas, dos residuos Cys18 e Lys20 comprometem a ligacao do receptor AT1 a AngII. 4. Celulas CHO expressando o receptor mas ou os mutantes C18F/K20A (da regiao N-terminal) e K102A (da terceira helice transmembranar) do receptor AT1, nao apresentam ligacao e resposta funcional significativa quando estimuladas com AngII. 5. A co-expressao dos receptores AT1 selvagem+mas em boa afinidade pelo agonista AngII porem em defiCiência na ativacao funcional, em comparacao com AT1 selvagem. 6. Celulas CHO co-expressando receptores K102A+mas nao apresentaram ligacao nem ativacao funcional quando estimuladas pela AngII. 7. A co-expressao dos receptores C18F/K20A+mas promove ligacao e ativacao funcional proximas as observadas para o receptor AT1 selvagem em resposta ao agonista AngII. 8. A regiao N-terminal do receptor AT1 de AngII e um importante ponto de interacao com o agonista e com outros receptores, possivelmente atraves da formacao de heterodimerosBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe