The transfected with the EJ-ras oncogene dysplay morphological changes, much higher expression of the Ras oncogene and deregulation of cell cicle, becoming mopre densely populated and serum-independent

Celulas endoteliais de aorta de coelho (EC) foram transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras-EC). As celulas transfectadas apresentam mudancas morfologicas, alta expressao do oncogene Ras, descontrole do ciclo celular, formam multicamadas e sao independentes de fatores do soro. Soro fetal bovino (SFB) e PMA (12-miristato 13-acetato de forbol) especificamente, estimulam a sintese do proteoglicano de heparam sulfato, sindecam-4, em celulas endoteliais de aorta de coelho (EC). Este efeito nao e observado em EJ-ras-EC. A cinetica de entrada da celula na fase S foi determinada pela sintese de DNA ([3H]-timidina e incorporacao de BrdU) e citometria de fluxo. O efeito mitogenico do SFB foi abolido por PMA nas celulas selvagens e PMA causa um bloqueio do ciclo celular na fase G1. Alem disso, o ciclo celular de EJ-ras-EC nao foi afetado pela adicao de FCS ou PMA. Usando um anticorpo monoclonal especifico para a sequencia N-terminal do core proteico do sindecam-4, foi demonstrado que celulas transfectadas com EJras apresentam um aumento na expressao de sindecam-4 (proteoglicano de heparam sulfato). O aumento e observado tanto para o proteoglicano presente nas celulas, como para o secretado para o meio de cultura. Analises estruturais nas cadeias de heparam sulfato usando heparitinases mostraram uma notavel diminuicao na O-sulfatacao na regiao do polimero contendo acido iduronico. Analise da expressao do core proteico do sindecam-4, epimerase e diferentes sulfotransferases por RT-PCR confirmam estes resultados. Transfeccao com EJ-ras leva a um aumento na sintese de heparam sulfato com uma diminuicao da sulfatacao, similar aos dados encontrados em tumores humanos e transformacao neoplasica. A sintese de acido hialuronico (AH) e tambem estimulada em celulas transfectadas com o oncogene Ej-ras. Celulas EJ-ras-EC retem pouca quantidade de AH nas celulas quando comparadas com as celulas selvagens(4 por cento e 26 por cento, respectivamente). Adesao e migracao celular na presenca de diferentes proteinas da matriz extracelular(fibronectina, FN; laminina, LN; colageno tipo I, Col I e colageno tipo IV, Col IV) foram tambem investigadas. Celulas transfectadas com oncogene EJ-ras aderem menos quando comparadas com as celulas selvagens, exceto para FN. Usando PD 98059, um inibidor de MAPKK, foi observado um aumento da adesao em colagenosBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe