The use of proviral DNA in substitution of viral RNA in HIV-1 genotyping test

Titulo: Uso do DNA proviral em substituicao ao RNA virai no teste de genotipagem do HIV 1 Objetivos: Determinar a frequencia das substituicoes de aminoacidos e suas consequencias em diferentes compartimentos genomicos, RNA viral e DNA proviral. Avaliar o uso do DNA proviral em substituicao ao RNA virai no teste de genotipagem. Metodologia: Estudo realizado com amostras de 10 pacientes da rede publica de São Paulo ja pertencentes ao projeto Genoma Virus financiado pela FAPESP, que se encontram em tratamento com anti-retrovirais. Deteccao de mutacoes que conferem resistencia parcial elou completa ao(s) medicamentos anti-retrovirais usados na terapia do portador do virus HIV-1 bem como dados de comparacao das mutacoes encontradas em dois compartimentos distintos (PBMC e Plasma) para a suGestão da utilizacao do DNA proviral para o teste de genotipagem. As amostras foram amplificadas pela tecnica denominada nested PCR para aq regiao ,0 po especificamente para os genes da protease e transcriptase reversa; devidamente purificadas e seqe ciadas (em duplicata) para a analise das mutacoes mais frequentes entre as amostras e a comparacao de maior I aparecimento de mutacoes nos compartimentos PBMC e Plasma. Resultados: Na regiao da protease foram encontradas 34 mutacoes em 8 pacientes , estudados; desta, 14 (41.2 por cento) sao/foram descritas como causadoras de resistencia e 20 (58,8 por cento) eram mutacoes nao indutoras de resistencia. Na regiao da transcriptase reversa, das mutacoes encontradas tambem em um total de 8 pacientes, 22 (36,7 por cento) causavam resistencia 38 (63,4 por cento) nao induziam...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe