Molecular targets involved in the antiproliferative effect of 1, 25(OH)2D3 in HC11 mouse mamary cells

A 1,25 dihidroxivitamina D3 (1,25(OH)2D3) e um hormonio esteroide relacionado com a homeostase do calcio e envolvido com o controle da proliferacao celular. Celulas mamarias murinas HC11 imortalizadas espontaneamente, retem caracteristicas de celulas normais e tem o crescimento inibido mediante exposicao ao hormonio o qual se correlaciona com um aumento das celulas em GO/G1. Nosso objetivo foi verificar o efeito da 1,25(OH)2D3 (100nM, 72h) sobre moleculas especificas reguladoras do ciclo celular (ciclinas e inibidores de quinase dependente de ciclina (p21WAF1/C/P1 e p27KIP1) do estado de fosforilacao da proteina de retinoblastoma (pRb), como sobre os genes de resposta imediata das familias de c-myc, c jun e c-fos, sobre o fator transformante b (TGF b1, 2 e 3) e seus receptores (Tb RI e RII) e a proteina ligante 3 de IGF (IGF-BP3) atraves da expressao de RNAm, por ensaio de protecao da ribonuclease, e de proteina, por analise de western blot e imunoprecipitacao. As celulas HC11 expressam basicamente RNAm de c-myc e os de L-myc e B-myc estao praticamente ausentes. O tratamento nao alterou o nivel da expressao destas moleculas se comparadas ao controle, e tambem nao modulou a expressao dos RNAm de max, mad, mxi, mad3 e mad4. Celulas HC11 apresentam principalmente RNAm de jun-B e Jun-D em relacao a c-jun, e de fra-2, em relacao a c-fos, fos-B e fra-1, e o hormonio nao regulou estes niveis de expressao. Detectamos nestas celulas um maior conteudo de RNAm de TGFb1 e b3 se comparados com o de TGFb2, e tambem observamos a expressao dos receptores TbRI e RII. Sugerindo que estes genes nao estejam envolvidos nos efeitos inibitorios da 1,25(OH)2D3. Celulas HC11 exibem preferencialmente RNAm e proteina de ciclina D1 em relacao a ciclinas D2 e D3. Apresentam ainda um grande conteudo de RNAm de ciclinas A2, B1 e H. Os niveis de RNAm e de proteina destas ciclinas nao sao modulados pelo hormonio. Observamos tambem a expressao do RNAm de ciclina E, cujos niveis nao variaram em celulas induzidas com 1,25(OH)2D3, embora uma queda da expressao desta ciclina, apos 72 h de cultura, independente do tratamento tenha sido verificada. Entretanto, a expressao proteica de ciclina E dobrou com o tratamento em comparacao a celulas controle (72h), sugerindo que esta modulacao ocorra a nivel pos transcricional. Celulas induzidas apresentam tambem uma elevacao do conteudo proteico de p21WAFilclP1 (1,4 vezes) em relacao a celulas...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe