Molecular structure and alternative splicing of the human carboxypeptidase M gene

Usando a tecnologia RACE os terminais 5' e 3' do RNAm da carboxipeptidase M ,PM) humana foram determinados e observamos ser divergente da seqüência publicada. Com esses resultados a estrutura completa do gene da CPM humana foi estabelecido baseado na seqüência genômica humana no GenBank. O gene apresentado contem 9 exons compreendendo pelo menos 75 kb da seqüência genômica. Um novo exon 1 de 30 pb foi identificado e uma seqüência promotora ipstream contendo vários sítios ligados a fatores de transcriçao foi encontrada pela análise no computador. Além disso, o códon de iniciaçao ATG foi detectado definindo uma regiao codificadora de 1329pb que codifica para uma proteína de 443 resíduos. adicionalmente, o sítio de poliadenilaçao foi descoberto determinado a regiao nao lodificadora de 2000 nucleotídeos. As fronteiras exon-intron divergem substancialmente comparado as outras carboxipeptidases básicas, CPD, CPE, CPN, AEBP1. Clonagem e sequenciamento dos produtos de RT-PCR de diferentes :tecidos revelaram um splicing alternativo dos exons 3 e 5 responsáveis pela geraçao de quatro diferentes isoformas do RNAm. RNA extraído de tecidos com tumor ,ontem mais RNAm de CPM de todas as isoformas dos o tecido controle sugerindo uma super regulaçao da expressao de CPM em tumores e originando uma questao do papel dessa atividade enzimática em câncer.BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe