Structure characterization and transcriptional regulation of mouse kinin B1 receptor gene

A bradicinina é um potente nonapeptídeo vasoativo gerado no sangue e tecidos pela açao proteolítica da calicreína, que libera BK e Lys-BK do cininogênio de alto e baixo peso molecular, respectivamente, no caso de injúria de tecido. O Sistema Calicreína-Cinina (SCC) está envolvido em várias fases da resposta inflamatória aguda e crônica bem como na regulaçao cardiovascular e nocicepçao. As cininas desempenham seu amplo espectro de açao através da ativaçao de pelo menos dois subtipos de receptores, denominados B1 e B2. Ao passo que o receptor 132 é amplamente distribuído nos tecidos de mamíferos, o subtipo B1 é pouco expresso em condiçoes normais, sendo contudo induzido em casos de inflamaçao e trauma e por componentes da resposta inflamatória tais como citocinas, fator de crescimento e lipopolissacarídeo. Estudos moleculares do receptor B 1 de diversas espécies têm auxiliado na compreensao dos mecanismos que regulam a induçao da expressao do receptor B1 em processos patológicos, estabelecidos por caracterizaçoes farmacológicas. A regiao codificadora do gene do receptor B1 de camundongo foi determinada por Pesquero e cols. em 1996, entretanto, nesta época nao era ainda conhecida a estrutura molecular do gene, nem tampouco as regioes e os fatores que regulam sua transcriçao. Dessa forma, o objetivo deste trabalho consistiu na caracterizaçao da estrutura molecular do gene do receptor 131 de camundongo, na localizaçao da regiao promotora, seqüências regulatórias e a identificaçao dos fatores de transcriçao envolvidos no controle da expressao desse gene. No presente trabalho caracterizamos o gene do receptor B1 de cininas de camundongo, pelo ensaio de Sistema de Amplificaçao Rápida da Terminaçao 5' do cDNA (5' RACE), a partir de diversos tecidos de camundongo. O gene é formado por dois exons separados por um intron, a regiao codificadora do receptor encontra-se no exon 2, e o exon 1 apresenta tamanhos variáveis (189, 100 e 84 pb) de acordo com o tecido. A regiao promotora (90pb) do gene do receptor B 1 apresenta um elemento regulador da transcriçao positivo, ao qual foi identificada a ligaçao do fator de transcriçao NF-kB e negativo, responsivos ao LPS em CML-A. A induçao da transcriçao pelo LPS ocorre através da ligaçao do heterodímero NF-kB p50/p65.BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe