Standardization of reverse transcriptase-polimerase chain reaction (RT-PCR) in acute promylocytic leukemia

A leucemia promielocitica aguda caracteriza-se por morfologia tipica, quadro clinico peculiar de sangramentos por CIVD e translocacao t(l5;17). A translocacao entre os cromossomos 15 e 17 resulta no rearranjo dos genes PML e RARA cujos transcritos sao evidenciaveis pela RT-PCR. O objetivo do presente trabalho foi padronizar as tecnica para deteccao do rearranjo molecular dos genes PML e RARA e comparar os resultados obtidos por esse metodo com aqueles da citogenetica classica. Foram estudadas 18 amostras de 13 pacientes com LPA sendo 12 ao diagnostico e 6 apos tratamento. O diagnostico foi feito atraves de hemograma, mielograma, citoquimica, fenotipagem e citogenetica. O RNA foi extraido pelo metodo usual e apos sintetizacao do cDNA foi feita a amplificacao genica pela RT-PCR. Para visualizacao do produto foi utilizado gel de agarose e fotografia. A analise citogenetica apresentou resultado em 10 (83 por cento) dentre 12 amostras estudadas ao diagnostico, sendo que 8 tinham a t(l5;17) e 2 eram normais. Das 6 amostras analisadas apos tratamento, em 2 nao se conseguiu material para analise, em 3 observou-se cariotipo normal e numa, a persistencia do clone anormal. Quatro dentre 8 pacientes com t(15;17) no cariotipo apresentaram positividade pela PCR. A ausencia de resultado em 5 casos deveu-se a qualidade inadequada da amostra. Nos dois casos em que nao foi possivel obter resultado citogenetico, foi possivel detectar o rearranjo molecular. Em conclusao, a RT-PCR foi padronizada e comparada com a citogenetica foi bastante util, particularmente, nos casos acompanhados evolutivamente onde foi possivel observar sua negativacao apos o termino da terapiaBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe