Comparative study of multidrug resistence gene (MDR1) expression and expression and function of glycoprotein-P in normal lymphocytes and in acute myeloid and blastic crisis of cronic myeloid leukemias

Um dos mais importantes mecanismos de resistencia ao tratamento quimioterapico e o associado a expressao do gene de resistencia a multiplas drogas (MDR1} e de seu produto, a glicoproteina-P (gp-P). Esta proteina de transporte da membrana celular protege as celulas alvo atraves do efluxo dos agentes citotoxicos ministrados. A expressao do fenotipo de MDR e, por si, fator de pior prognostico nas LMA. A grande variabilidade na frequencia de resultados positivos observada na literatura (20 por cento a 80 por cento ), entretanto, demonstra a necessidade de padronizacao das tecnicas envolvidas na analise deste fenotipo. A identificacao, em trabalhos anteriores, de casos onde a expressao e a funcao da gp-P foram discordantes e a observacao de que o efluxo da gp-P pode ser inibido por certas substancias utilizadas na clinica, evidenciaram a necessidade de associar a avaliacao do fenotipo, a analise funcional da gp-P. No presente estudo avaliamos comparativamente os tres niveis de expressao do fenotipo MDR em 19 portadores de LMA (l3 de novo, 3 em recidiva, 2 LMC agudizadas, l secundaria a sindorme mielodispiasica), utilizando, como controle, linfocitos do sangue periferico de individuos normais e celulas das linhagens CCRF-CEM e CEM/VLB atraves dos ensaios: (a) de expressao do gene MDR1 pela RT-PCR, (b) de expressao da gp-P com anticorpo monoclonal especifico (MRKl6) e (c) de funcao da gp-P atraves do efiuxo de corante fluorescente - rhodamina 123 (rh l 23) - e inibicao deste efluxo com verapamil . Obtivemos amplificacao do gene em todas as amostras. A expressao do MDR1 mais alta (>30 por cento ) foi observada em todos os linfocitos normais e em 47 por cento dos pacientes. Nas leucemias, esta expressao genica mais alta se correlacionou com a leucometria elevada (p=O,O3). Na avaliacao da expressao e da funcao da gp-P, o teste estatistico de Kolmogorov-Smirnov (valor D) permitiu distinguir melhor as amostras com baixa porcentagem de celulas positivas. A expressao da gp-P esteve presente em todos os linfocitos normais e em 84 por cento dos pacientes. A avaliacao da atividade funcional da gp-P em celulas blasticas previamente caracterizadas quanto aos mercadores de linhagem e a marcacao com MRKl6 permitiu identificar precisamente o efluxo nestas celulas. Observamos aumento da atividade funcional da gp-P e efluxo de rhl23 inibido pelo verapamil em todas as amostras de linfocitos. Nas leucemias, as amostras positivas foram 89 por cento...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe