Effect of remote ischemic preconditioning in fresh and cryopreserved ovarian autograft rats

Objective: To evaluate remote ischemic preconditioning effect (PCI-R) in autologous fresh ovarian transplant and cryopreserved transplant in female rats. Methods: 97 young female Wistar EPM-1 rats were used in the experiment. They were divided in three study groups: Group 1: To determine the best PCI-R timing; Group 2: To evaluate the precocious and late repercussion of PCI-R in ovarian transplants (after 4, 7, 14, and 21 days); Group 3: To compare PCI-R effect in fresh and cryopreserved ovarian transplant, after 30 days. Vaginal smears, estradiol serum dosage, morphology, morphometry, neoangiogenesis by VEGF, proliferative activity by-ki-67 and apoptosis by caspasis-3 were evaluated. PCI-R was performed in the common iliac artery. Autologous ovarian tissue was implanted integrally without vascular anastomosis in the retro peritoneum, fixed with a non- absorbable stitch. Euthanasia was performed with a lethal dose of anesthetics used after material collection for analysis. Results: The best established PCI-R timing was 15 minutes when there was preservation of a greater number of viable ovarian follicles, high rate of cellular proliferation and neoangiogenesis. The animals that received transplants presented a larger number of viable ovarian follicles and corpora lutea than the ooforectomized groups. PCI-R interfered with follicular preservation at long term, inducing greater resistance in the late evaluation periods. After 30 days of the transplant, PCI-R caused an increase in the total ovarian follicles (mature and immature) and in the functioning of corpora lutea, with a tendency to increase vascularity, proliferative activity and less apoptotic activity in the late periods of evaluation. All transplanted groups presented higher hormonal levels than the control group. PCI-R caused precocious ovarian activity and increased the number of cycles in fresh transplants while in the cryopreserved transplants there was no interference. Conclusions: The 15 minute PCI-R presented a benefic effect on the transplanted ovarian tissue, inclusive in functional recovery, with a greater effect in the late post-transplant phases. The 14th day was a landmark in graft recovery and, from then on, the process of recovery was stabilized. PCI-R presented a better effect on the fresh transplanted tissue while in the cryopreserved transplant the evolution was good, independently of PCI-R.Objetivo: Avaliar o efeito do precondicionamento isquêmico remoto (PCI-R) no transplante autólogo de ovário fresco e criopreservado em ratas. Métodos: Foram utilizadas 97 ratas Wistar EPM-1, adultas jovens, distribuídas em três Séries de estudo: Série 1: Determinar do melhor tempo de PCI-R; Série 2: Avaliar a repercussão precoce e tardia do PCI-R no transplante ovariano (após 4, 7, 14 e 21 dias); e, Série 3: Comparar o efeito do PCI-R no transplante ovariano a fresco e criopreservado, após 30 dias. Foram avaliados esfregaços vaginais, dosagem sérica de estradiol, morfologia, morfometria, estudo da neoangiogênese pelo VEGF, da atividade proliferativa pelo ki- 67 e apoptose pela caspase-3. O PCI-R foi realizado na artéria ilíaca comum. O tecido ovariano autólogo foi implantado íntegro e sem anastomose vascular em retroperitônio, fixado por meio de um ponto com fio inabsorvível. A eutanásia foi realizada por meio de dose letal dos anestésicos utilizados após coleta dos materiais para análise. Resultados: O melhor tempo estabelecido para o PCI-R foi de 15 minutos, em que houve preservação de maior número de folículos ovarianos viáveis, altas taxas de proliferação celular e neoangiogênese. Os animais transplantados apresentaram maior número de folículos ovarianos e de corpos lúteos do que os grupos ooforectomizados. O PCI-R interferiu na preservação folicular em longo prazo, induzindo maior resistência nos períodos mais tardios de avaliação. Após 30 dias de transplante, o PCI-R promoveu aumento dos folículos ovarianos totais (imaturos e maduros) e de corpos lúteos funcionantes, com tendência a aumento da vascularização, da atividade proliferativa e menor atividade apoptótica em fases tardias de avaliação. Todos os grupos transplantados apresentaram níveis hormonais mais elevados do que o grupo controle. O PCI-R promoveu retorno mais precoce da atividade ovariana e aumentou o número de ciclos no transplante a fresco enquanto que no criopreservado não houve interferência. Conclusões: O PCI-R de 15 minutos apresentou um efeito benéfico sobre o tecido ovariano transplantado, inclusive no restabelecimento funcional, com efeito maior nas fases mais tardias pós-transplante. O 14º dia foi um marco na recuperação do enxerto, a partir do qual o processo de recuperação se estabilizou. O PCI-R apresentou melhor efeito sobre o tecido transplantado a fresco enquanto que no criopreservado a evolução foi boa, independentemente do PCI-R.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)FAPESP: 2007/00107-9FAPESP: 2007/00394-8TEDEBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe