Analysis of antimicrobial resistance and genotype of Helicobacter pylori in pediatric patients

Helicobacter pylori é o principal agente de gastrite e fator de risco para úlcera péptica e câncer gástrico. A evolução da infecção está relacionada a diversos fatores bacterianos, incluindo cagA, vacA e iceA. A infecção ocorre geralmente na infância e persiste pela vida, ao menos que tratado com terapia antibacteriana. No entanto, a resistência aos antibióticos é a principal causa do fracasso do tratamento. O objetivo deste estudo foi analisar a resistência antimicrobiana e o genótipo de H. pylori em 217 crianças encaminhadas, entre 2008 e 2009, ao Setor de Endoscopia do Instituto da Criança da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, para esclarecimento de manifestações clínicas relativas ao trato digestivo alto. Fragmentos de mucosa gástrica foram obtidos por endoscopia e processados para exame histológico, teste da urease e cultura bacteriana. Resistência aos antibióticos foi determinada pelo método da difusão em disco, e os MICs foram determinados por E-test. As mutações pontuais A2142G ou A2143G que conferem resistência a claritromicina foram pesquisadas por PCR-RFLP com as enzimas de restrição BsaI e MboII. Os genótipos vacA, cagA, iceA e babA2 foram detectados por PCR a partir das amostras de biópsias gástricas. H. pylori foi isolado em 45 (20,7%) das 217 crianças estudadas, sendo 13 com gastrite crônica leve, 28 com gastrite crônica moderada, 2 com gastrite crônica intensa e 2 com mucosa normal. Resistência à claritromicina, metronidazol, amoxicilina e tetraciclina foi detectada em 27%, 13%, 4% e 0% das amostras, respectivamente. A PCR-RFLP detectou 12 (26,7%) amostras de H. pylori com genótipo resistente, sendo 8 amostras com mutação A2143G e 4 com mutação A2142G. O gene vacA foi detectado em todas as 45 amostras positivas para H. pylori, sendo os alelos vacAs1m1, vacAs2m2, vacAs1m2 ou vacAs2m1 encontrados em 57,7%, 33,3%, 4,4% e 4,4% das amostras, respectivamente. Os alelos iceA1 e iceA2 foram detectados em 9 (20%) e 31 (68,9%) amostras, respectivamente. Das 45 amostras, 28 (62%) foram positivas para cagA e 38 (84,4%) para babA2. O genótipo vacA s1m1 cagA iceA2 foi encontrado significantemente mais frequentemente nos pacientes com gastrite crônica moderada e intensa (77%) do que em pacientes com gastrite leve (23%) (P < 0,001). Em adição, foi observada associação significativa entre a resistência a claritromicina e o genótipo vacA s1m1 (P = 0,007) ou iceA2 (P = 0,038).Helicobacter pylori is implicated often as the causative agent of chronic gastritis, gastric ulcers, and gastric carcinoma. Several virulence factors for H. pylori have been identified including cagA, vacA, and iceA. H. pylori infection, generally acquired in childhood, persists asymptomatically for decades, but can be cured by antibiotics. However, antibiotic resistance is frequently associated with eradication failure. The aim of this study was to investigate the antibiotic resistance and genotypes in children with H. pylori, and to examine the association of genotypes and severity of gastritis. A total of 217 consecutive child patients, aged 1 to 18 years (mean age 10 years) (105 females and 112 males), who underwent upper gastrointestinal endoscopy for the evaluation of dyspeptic symptoms at the outpatients clinic of the Endoscopy Children's Institute, School of Medicine, University of São Paulo, during 2008 and 2009 were included. Antral and body gastric biopsies were processed for histological examination, urease test and culture. Resistance to clarithromycin, metronidazole, amoxicillin, and tetracycline was determined by the disc diffusion method and MICs were determined by the E-test. A2142G or A2143G point mutations related to clarithromycin resistance in the 23S rRNA gene were investigated by PCR-RFLP using BsaI and MboII enzymes. The vacA, cagA, iceA, and babA2 genotypes were detected by PCR. H. pylori was isolated in 45 (20.7%) of the 217 children; 13 had mild chronic gastritis, 28 had moderate chronic gastritis, 2 had marked chronic gastritis, and 2 had normal gastric mucosa. Resistance to clarithromycin, metronidazole, amoxicillin and tetracycline was detected in 26.7%, 13%, 4% and 0% of strains, respectively. PCR-RFLP was performed with all 12 clarithromycin-resistant isolates; 8 had the 23S rRNA A2143G point mutation, and 4 had the 23S rRNA A2142G mutation. vacA was detected in all 45 H. pylori-positive gastric biopsy specimens. The vacA genotypes s1m1, s2m2, s1m2 or s2m1 were found in 57.7%, 33.3%, 4.4%, 4.4% of specimens, respectively.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESPTEDEBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe