Caracterização de isolados de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli

A simple, quick and easy protocol was standardized for extraction of total DNA of the bacteria Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. The DNA obtained by this method had high quality and the quantity was enough for the Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) reactions with random primers, and Polymerase Chain Reaction (PCR) with primers of the hypersensitivity and pathogenicity gene (hrp). The DNA obtained was free of contamination by proteins or carbohydrates. The ratio 260nm/380nm of the DNA extracted ranged from 1.7 to 1.8. The hrp gene cluster is required by bacterial plant pathogen to produce symptoms on susceptible hosts and hypersensitive reaction on resistant hosts. This gene has been found in different bacteria as well as in Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (9). The primers RST21 and RST22 (9) were used to amplify the hrp gene of nine different isolates of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli from Botucatu, São Paulo State, Brazil, and one isolate, "Davis". PCR amplified products were obtained in all isolates pathogenic to beans.Um protocolo simples, rápido e fácil foi padronizado para extração de DNA total da bactéria Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. O DNA obtido por esse método foi de ótima qualidade e quantidades suficientes para reações de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) com "primers" randômicos e PCR (Polymerase Chain Reaction) com "primers" do gene de hipersensibilidade e patogenicidade (hrp). O DNA obtido não apresentou nenhuma contaminação por proteínas ou carboidratos, sendo a razão 260 nm/ 380nm entre 1,7 a 1,8. O agrupamento do gene hrp (reação de hipersensibilidade e patogenicidade) é requerido através do patogeno bacteriano de planta para produzir sintomas nos hospedeiros suscetíveis e reação hipersensível em hospedeiros resistentes é encontrado em diferentes bactérias e também em Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (9). Os primers RST21 e RST22 (9) foram usados para ampliar o gene de hrp de nove diferentes isolados de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, sendo oito de Botucatu, São Paulo, Brasil, e um de "Davis" (EUA). Foi encontrado o produto de PCR amplificado em todos os isolados testados e todos eram patogênicos ao feijão. A presença do gene em isolados patogênicos de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli foi discutido geneticamente